מאמר שיטה

צביעה שלילית של אקסוזומים מטוהרים: הליך להמחשת מורפולוגיה אקסוזום באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת

30 באפריל 2023

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Jung, M. K. et al. הכנת דגימה והדמיה של אקסוזומים על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים שידור. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מתאר הליך להכתמה שלילית של אקסוזומים מטוהרים. האקסוזומים המוכתמים באופן שלילי מצולמים באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת. טכניקה זו מסייעת לדמיין את המורפולוגיה של אקסוזומים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. כתמים שליליים

  1. פריקה זוהרת של רשתות EM דקיקות מנחושת 200 רשת מצופות סרט פחמן למשך דקה אחת על ידי פריקת זוהר.
  2. תקן אקסוזומים מטוהרים עם 1 מ"ל של 2% paraformaldehyde (PFA) במשך 5 דקות.
    הערה: אדי פרפורמלדהיד רעילים. כל העבודה צריכה להיעשות במכסה אדים מאוורר.
  3. טען 5-7 μL פתרון השעיה אקסוזום על הרשת ודגר במשך דקה אחת. אם ריכוז האקזוזום גבוה מדי, מדללים את הריכוז לחצי עד חמישית.
  4. יש להכתים מיד עם ~20 טיפות של תמיסת אורניל אצטט מסוננת 1% (UA) על פני רשת הקרינה האלקטרומגנטית באמצעות מזרק.
  5. הסר את תמיסת ה- UA העודפת ברשת על-ידי יצירת קשר עם קצה הרשת באמצעות נייר סינון.
  6. שטפו במהירות את הרשת בטיפת מים. שלב זה יסיר את תמיסת הכתמים העודפים.
  7. מניחים את הרשת על השולחן על ידי החזקתה בפינצטה, ומכסים את הרשת חלקית בכלי תרבית לייבוש במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
  8. אחסן את הרשת בקופסת רשת EM לתצפית עתידית על ידי TEM ב- 80 kV.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אורניל אצטטEMS22400כימיקלים מסוכנים
מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורתג'אולJEM2200FS
פריקת זוהרג'אולJFC1100E
פרפורמאלדהידEMS19210
Formvar ציפוי פחמן נחושת
רשת (200 רשת שינוי)		EMSFCF200-CU
פורמבר מצופה פחמן ניקל
רשת (200 רשת שינוי)		EMSFCF200-NI

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

EMGlow Discharge

מאמרים קשורים