Murine Vertical Sleeve Gastrectomy: הליך כירורגי להקטנת קיבה במודלים ניסיוניים של עכברים

תקציר

מקור: Garibay, D., Cummings, B. P. מודל מורין של כריתת קיבה בשרוול אנכי. J. Vis. Exp. (2017)

בסרטון זה, הליך כריתת קיבה שרוול אנכי מבוצע על מודל עכבר ניסיוני. הליך זה מסייע להסיר חלק משמעותי של הבטן לאורך העקמומיות הגדולה שלה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. כריתת קיבה בשרוול אנכי ונהלי דמה

1. ביום הניתוח, לשקול עכברים כדי לקבל מדידת משקל בסיסית.
2. ציידו את חדר הניתוח במערכת הרדמה, אמבט מים מחוממים וכרית חימום. כוונו את אמבט המים לטמפרטורה של 37°C והשתמשו בו כדי לחמם תמיסת מלח 0.9% להשקיה. נקו את השדה הכירורגי עם 70% אתנול והשתמשו בטכניקה סטרילית לפתיחת חבילת ניתוחים וכלים אוטוקלאביים.
   הערה: כרית החימום משמשת לשמירה על חום בעל החיים במהלך הניתוח וההתאוששות מההרדמה.
3. באמצעות תא אינדוקציה, מרדימים את העכבר עם קצב זרימה של 5% איזופלורן ו-O₂ של 1 ליטר/דקה. ודא שהעכבר נמצא במישור ההרדמה המתאים על ידי ביצוע צביטת בוהן. שמור על העכבר עם איזופלורן של 1-3% וקצב זרימה O₂ של 0.6 ליטר/דקה לאחר השגת מישור הרדמה עקבי
.
4. לאחר שהעכבר מורדם, יש להניח משחת עיניים (ראו טבלת חומרים) על עיניו כדי לשמור עליהן לחות במהלך הניתוח. בשלב זה, גם לנהל משכך כאבים, כגון meloxicam (2 מ"ג / ק"ג תת עורית). חתכו את השיער מהטבור לבית השחי והחזיקו את העור בעדינות כדי לספק מתח.
   1. מכיוון שעורו של העכבר דק ועדין, יש להקפיד שלא לגרום לנגעים בעור בעת גזיזת השיער. נקו את העור עם פובידון-יוד ואלכוהול.
   2. לבשו כפפות סטריליות והכינו את שדה הניתוח הסטרילי ואת המכשירים. בצע את שאר ההליך בטכניקה סטרילית. הכן שדה כירורגי סטרילי על ידי הנחת וילונות כירורגיים סטריליים משני צדי העכבר. השתמש ברדיד פח autoclaved כדי ליצור וילון כירורגי עבור העכבר.
   3. חתכו חור קטן ברדיד הפח כדי לאפשר גישה לבטנו של העכבר.
5. בצע חתך של העור מאמצע הבטן (הטבור) לרמה של הסחוס xiphoid באמצעות מספריים קשתית. זהה את linea alba והשתמש במספריים הקשתית כדי לחתוך דרך דופן הגוף לאורך linea alba. השתמש CTAs כדי להרים בעדינות את הבטן מתוך הבטן ולאחר מכן לנתח בבוטות את omentum גדול יותר מתוך העקמומיות הגדולה יותר של הבטן.
6. קשרו את עורק הקיבה הקצר העובר בין פונדוס הקיבה לטחול על ידי הנחת שתי ליגטורות באמצעות תפר נספג 7-0 מונופילמנט. השתמשו במספריים קפיציות כדי לחתוך בין שתי הליגטורות. לאחר המעבר של העורק, יש להוציא את הקיבה באופן מלא מחלל הבטן. מניחים גזה מתחת לבטן ורטוב עם מלוחים כדי לשמור על לחות הרקמה.
7. עבור הליך VSG, לקשור את הענפים הבולטים של עורק קיבה ווריד עם תפר 7-0 monofilament נספג עם מחט taper באמצעות 3 זריקות עבור כל קשר. מקם את הליגטורות ממש מתחת (כלומר, לכיוון העקמומיות הקטנה יותר של הקיבה) את הקו המיועד של transsection.
   הערה: הקו המיועד של טרנסקציה מתחיל ב~ 2 מ"מ מעל (כלומר לכיוון העקמומיות הגדולה יותר של הבטן) החריץ הלבבי של הקיבה ולפחות 2 מ"מ מתחת למרגו פילקטוס ומשתרע עד לקצה הפרוקסימלי של האונה הימנית של הלבלב. בדרך כלל, ישנם 4 כלי דם לכל קיר קיבה כי צריך להיות קשיר; עם זאת, זה עשוי להשתנות בין עכברים.
   1. כדי למנוע שפיכה של תוכן קיבה במהלך כריתת קיבה, הניחו קו רציף פשוט של תפר העובר דרך שני דפנות הקיבה ממש מתחת לקו הטרנסקציה המיועד באמצעות תפר נספג מונופילמנט 6-0 עם מחט מחודדת. מתחילים את קו התפרים מימין לוושט ומתחת למרגו פילקטוס ומסיימים ממש מעל הלבלב.
   2. מניחים המוסטטים דקים מעל קו התפרים ומשתמשים במספריים קפיציים כדי לחתוך בין קו התפרים להמוסטטים. הסר את רקמת הקיבה הטרנסקטיבית משדה הניתוח הסטרילי. השתמש CTAs כדי לנקות את הדם ולעכל את הקיבה.
   3. חיזוק של דפנות הקיבה באמצעות תפר נספג 6-0 מונופילמנט עם מחט מחודדת באמצעות תבנית פשוטה ולא רציפה.
      הערה: תבנית תפר פשוטה ולא רציפה מומלצת מכיוון שהיא מספקת סגירה בטוחה יותר מתבנית התפר הרציף הפשוט.
   4. שטפו את שאריות הקיבה במי מלח לאורך כל ההליך על מנת לשמור על הרקמה לחה ונקייה. השתמש במחט gavage 20G המחוברת מזרק 20 מ"ל כדי לבצע שטיפת קיבה עם מלוחים. השתמש בגודל זה כדי להבטיח לחץ הולם מסופק מבלי להסתכן נזק לרקמת הקיבה מלחץ מוגזם או נזק לרקמת קיבה בשוגג משימוש במחט מחודדת רגילה.
   5. השתמש מינימום של 20 קשר כדי לסגור היטב את הבטן; שימו לב לסגירה לאורך צד הוושט, מכיוון שצד זה קשה יותר לגישה ולכן הוא לעתים קרובות אתר של לחישה.
   6. ודא שאין דליפות על ידי לחיצה עדינה על הבטן עם CTAs. אם מזוהות נזילות, הניחו קשרים פשוטים ולא רציפים נוספים על אזורי הדליפה ולאחר מכן בדקו שוב את הדליפה. בדיקת דליפה עד שלא מזוהה דליפה.
   7. בצע שטיפה יסודית סופית של הקיבה באמצעות לפחות 60 מ"ל של מלוחים כדי להבטיח כי שום חומר חלקיקי זיהומי לא נשאר מאחור.
8. הניחו את הקיבה בחזרה לחלל הבטן מתחת לכבד באמצעות CTA. הניחו CTAs לאורך האספקט הגבי של חלל הבטן כדי לספוג את כל עודפי הנוזלים. באמצעות מחט קהה של 18 גרם, יש להזריק תמיסת רינגר מניקה (LRS) עם או בלי אנטיביוטיקה (0.5 מ"ל LRS +/- 20 מ"ג/ק"ג אנרופלוקסצין) ישירות לחלל הבטן, ממש לפני הסגירה.
   הערה: זה מחליף את אובדן הנוזלים שחווה במהלך הניתוח ומספק שיטה ליישום ישיר של אנטיביוטיקה לאתר הניתוח כדי לסייע בהתאוששות.
9. סגור את שכבת שריר הבטן באמצעות תפר 6-0 מונופילמנט נספג עם מחט מחודדת בתבנית פשוטה ולא רציפה. לאחר מכן, סגרו את שכבת העור עם תפר נספג 6-0 מונופילמנט בתבנית רציפה פשוטה.
10. הניחו דבק רקמות על העור וקפלו את העור מעל קו התפר כדי לקבור את התפר כך שהעכבר לא יוכל להפריע לסגירת הפצע לאחר הניתוח.
11. כבו את האיזופלורן ותנו לעכבר להתאושש על כרית החימום למשך 10-15 דקות לפני החזרתו לכלוב הביתי שלו. אל תשאירו את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה ומסוגל לנוע.
12. החזיקו את בעלי החיים ביחידות עד להחלמה מלאה מהניתוח.
    הערה: אם רוצים לקבל מדידות מדויקות של צריכת מזון במהלך המחקר, יש להמשיך לשכן עכברים בנפרד לאורך כל המחקר. קיים סיכון של חסימת גוף זר מאכילת מצעים בכלוב הביתי. יש לשכן בעלי חיים בכלובים ללא מצעים, למעט חומר קינון להעשרה (ראו טבלת חומרים).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
תפר 6-0	אתיקון	Z432	מונופילמנטנספג/מתחדד
תפר 7-0	קובידיאן	8866127-01	מונופילמנטנספג/מתחדד
צמר גפן	פישרברנד	23-400-118	קטן
צמר גפן	פישרברנד	233-400-101	גדול
רדיד	מגוון
וילונות ניתוח	מגוון
0.9% תמיסת מלח	מגוון
מנהל התקן מיקרו-מחט	כלים מדעיים משובחים	12075-14
מספריים קפיציים	כלים מדעיים משובחים	15396-00
אלכוהול	מגוון
משחת עיניים	משחה וטרינרית Paralube®	17033-211-38
Meloxicam (Metacam)	בורינגר אינגלהיים	141-213	5 מ"ג/מ"ל
המוסטט דק	כלים מדעיים משובחים	13021-12
מזרק 20 מ"ל	מגוון
אנרופלוקסצין	בייטריל	08713254-186599	22.7 מ"ג/מ"ל