מיצוי שרירי שלד בגפיים האחוריות: הליך להסרת שרירי השלד של הגפיים האחוריות ממודל מורין

תקציר

מקור: Bonetto, A. et al. עכבר נושא גידולי קרצינומה של המעי הגס-26 כמודל לחקר סרטן Cachexia. J. Vis. Exp. (2016)

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך להסרת שרירי השלד האחוריים ממודל עכבר. השרירים שנכרתו יכולים להיות מאוחסנים בטמפרטורות נמוכות יותר עד לניתוח נוסף במורד הזרם.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. כריתת רקמות ואיברים

הערה: לשימוש ברקמות במבחני ביולוגיה ביוכימית או מולקולרית, תכננו לשקול כל איבר ורקמה והכניסו מקטע מיד לתוך צינוריות קריו-צינוריות מסומנות מראש. יש להקפיא בחנקן נוזלי ולאחסן בטמפרטורה של -80°C.

1. על מנת למנוע זיהום של דגימות רקמות עם פרווה, לרסס 70% אתנול על כל הגוף.
2. הניחו את העכבר על מיטת דיסקציה במצב שכיבה והושיטו איבר אנכית על ידי חיבור כף הרגל למהדק בורט מוגבה.
3. אחזו בעור הגפה התחתונה בעזרת מלקחיים של Dumont, והשתמשו במספריים העדינים המעוקלים כדי להסיר בעדינות את העור ואת הפאשיה, ולחשוף את בטן השרירים הבסיסית של הגפה התחתונה.
4. זיהוי שריר הגסטרוקנמיוס בגפה התחתונה האחורית על פי מוצאו בקונדילים הלטרליים והמדיאליים על עצם הירך האחורית והכנסתו בקלקניוס דרך גיד הקלקניאל.
   1. המשך לחתוך את גיד calcaneal gastrocnemius. אחזו בקצה הדיסטלי של הגסטרוקנמיוס בעזרת מלקחיים של דומונט ומשכו את בטן השריר לכיוון מוצאו. באמצעות מספריים, לחתוך את השריר במוצא קרוב ככל האפשר לעצם הירך. מניחים את השריר בצלחת. לשקול אותו מיד ולהקפיא אותו בצינור בחנקן נוזלי.
      הערה: הקפד לא הבלו שריר soleus יחד עם gastrocnemius. אם זה קורה, הסר בזהירות את הסולאוס על ידי משיכה עדינה שלו עם המלקחיים.
5. המשך זיהוי וכריתת שריר הטיביאליס הקדמי ממקורו במשטח האנטרולטרלי של השוקה והחדרתו בכתב היתדות המדיאלי דרך הגיד הדיסטלי שלו.
   1. על מנת שיהיה מנוף, החזק את כף הרגל על ידי אחיזת הספרות עם האצבע המורה והאגודל. הכניסו את קצה המלקחיים של דומונט מיד מתחת לגיד הדיסטלי השטחי של הטיביאליס והזיזו את המלקחיים כך שניתן יהיה להשתמש בצד הקהה כדי לנתק את בטן שריר הטיביאליס מרקמת החיבור שמתחתיה.
   2. חותכים את הגיד הדיסטלי באמצעות מספריים מעוקלים עדינים ולאחר מכן חותכים את השריר במוצא קרוב ככל האפשר לשוקה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
עכברי CD2F1	הארלן	60
מכשיר הרדמה	EZ-הרדמה	EZ-7000
אוקטובר	רקמות-טק	4583
קריוסטט	לייקה	CM1850
דיסקי שעם	מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים	63305
מיקרוטיינר	ב.ד.	365873
Superfrost בתוספת מגלשות זכוכית	VWR	48311-703
סטרפטומיצין-פניצילין	סלגרו	30-002-CI