הכנת תושבת שלמה של מעי עכבר: שימוש במכשיר פשוט לחיתוך המעי להכנת תושבת שלמה

תקציר

מקור: Yoneda, M. et al. מכשיר פשוט להכין במהירות תושבות שלמות של מעי העכבר. J. Vis. Exp. (2015)

בסרטון זה אנו מדגימים הכנה מלאה של מעי העכבר באמצעות מכשיר פשוט לחתך מעיים. התושבות המתקבלות הן באיכות מעולה ואחידה וניתן להשתמש בהן לניתוחים היסטולוגיים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. התקן

1. מכונה את החלק העיקרי של בסיס המכשיר מתוך גוש מוצק של שרף אצטיל בצפיפות גבוהה, כמתואר בכתב יד זה. בכל קצה, צרו רצועות מוגבהות בגובה 3 מ"מ ומכונות חלקים מתוך חריצים בקוטר 2.5 מ"מ כדי לקחת את המוטות (ראו איור 1 ואיור 2).
2. הכינו מוטות מפלדת אל-חלד בקוטר 2.4 מ"מ עם קצוות מעוגלים.
הערה:המסגרת הראשית של המכסה יוצרה במכונה מתוך צלחת Duralumin.

2. שימוש במכשיר

1. יש לנתח את המעי הדק ואת המעי הגס מחלל הבטן באמצעות מספריים ואצבעות בכפפות. הסר את mesentery על ידי מחזיק אותו עם מלקחיים מעוקל בעדינות למשוך אותו הרחק מן המעי.
2. שטפו את המעיים במי מלח קרים חוצצים פוספט (PBS, pH 7.4) באמצעות קצה פיפטה מסוג גילסון, שנחתך בקצהו הרחב יותר כך שהוא יכול להתאים למזרק פלסטיק בנפח 10 או 20 מ"ל
.
3. הניחו את המעי הדק (SB) על גיליון מגבת נייר וחלקו לשלושה חלקים שווים באורך (פרוקסימלי, אמצעי ודיסטלי – SB1, SB2 ו-SB3) באמצעות מספריים. הסר את cecum ולהניח את המעי הגס.
4. בצע כמה חתכים קטנים מאוד לתוך קטעי המעי עם מספריים כדי לאפשר לנוזל לברוח ולהניח גיליון של מגבת נייר על המעיים בעדינות להעביר אצבע על ההכנות כדי לסחוט את הנוזל ואת כתם יבש.
5. הרימו את החלקים והכניסו את מוטות הנירוסטה שהורטבו בעבר על ידי השריה בכוס מלח חוצצת פוספט.
   הערה: המעי יכול להיות הפוך אם רוצים בכך (הופך מבפנים החוצה).
6. תייגו פיסת כרטיס או נייר סינון חתוכים לפי גודל כדי להתאים לבסיס המכשיר. עיפרון הוא הטוב ביותר, כפי שהוא אינו מושפע כמעט מכל הפתרונות. תאריך נתיחה שלאחר המוות, קוד ניסוי ומספר זיהוי בעלי חיים מוצעים.
7. הנח את הכרטיס או נייר הסינון בבסיס ההתקן. הכנס את המוטות והמעיים לחריצים שבבסיס המכשיר. ודא שהקצה הפרוקסימלי של המקטעים ממוקם באופן סטנדרטי. הקצוות הפרוקסימליים צריכים להיות ליד תוויות הכרטיס.
8. הנח את החלק העליון של המכשיר מעל הבסיס. השתמש בסורגים הזוויתיים כדי להנחות להב אזמל כדי לחתוך את המקטעים לאורך.
   הערה: זה עוזר אם הרקמה מוחזקת בעדינות ובזהירות עם אצבע כדי להבטיח שהיא לא זזה עם הסכין.
9. הסר את החלק העליון של המכשיר. הסר בזהירות את נייר הסינון והרקמות (עדיין על המוטות שלהם).
   הערה: חתיכת כרטיס קשיח המונחת מתחת לנייר הסינון תסייע בהרמה.
10. מעט רטובים (עם קצה אצבע בכפפה טבולה ב-PBS) את המקטעים. גלגלו את המוט, מצד לצד, כדי לפתוח את המעיים ולפרוס אותו שטוח. לאחר מכן הרקמה תידבק לנייר הסינון.
11. לבחון חזותית את ההכנות עבור נגעים גסים.
12. מעבירים את הרקמה המודבקת לנייר הסינון לאמבטיה רדודה (או קופסת סנדוויץ') המכילה קיבוע.
    הערה: לאחר שהרקמה נצמדת לנייר הסינון או לכרטיס, היא תישאר מחוברת היטב. ניתן להשתמש במגוון רחב של מקבעים כדי לשמר את ההכנה. מומלץ להשתמש בנוזל של קרנוי לחקר התפשטות תאי המעי, שהוא הקיבוע האידיאלי לשיטות התרבות התאים הטובות ביותר; עם זאת, פורמלין או קיבועים רבים אחרים יכולים לשמש גם אם יש צורך בנקודות קצה אחרות.
13. לאחר קיבוע (בדרך כלל 3 שעות), להעביר את ההכנות לתוך אתנול 70%. לאחר מכן ניתן לאחסן את הדגימות עד לצורך. ניתן לחקור את התכשירים פנים אל פנים ו/או להשתמש בהם להכנת דגימות היסטולוגיות עבור H&E או טכניקות צביעה היסטולוגיות אחרות, אימונוהיסטוכימיה ו/או הכלאה באתר.
    הערה: קיבוע ממושך יכול להפחית תגובתיות אימונוהיסטוכימית ו / או תגובתיות הכלאה באתר. קופסאות סנדוויץ' פוליפרופילן אידיאליות לאחסון מספר רב של תכשירים.
14. במידת הצורך, ניתן להפוך את הרקמות הקבועות ממקטעי המעי השונים ל'לחמניות שוויצריות' ולהכתים אותן בכל מגוון השיטות ההיסטולוגיות, כולל אלה שתוארו לעיל. כדי ליצור "רול שוויצרי" מוציאים את מקטעי המעי מנייר הפילטר, מגלגלים סביב מקל קוקטייל או קיסם, מאבטחים בעזרת סיכה אנטומולוגית ומעובדים להטמעת שעווה.
15. במידת הצורך, הכתימו את הרקמה בתפזורת בכחול מתילן כדי לדמיין מוקדי קריפטה חריגים.
16. ציון ההכנות הקבועות בשעות הפנאי.

תוצאות

איור 1. תמונות של המכשיר המקורי.המכשיר המקורי נבנה מכמה חתיכות מתכת, שהוכנו בעבודת יד. (א) המכשיר שהורכב. (B) החלק העליון של המכשיר הוסר כדי להראות את המוטות במקומם.

איור 2. תמונות של המכשיר שעוצ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
דלרין	ריאן פלסטיק, ארלז ברטון, בריטניה		חומר דומה לשרף אצטלי בצפיפות גבוהה יספיק
צלחת Duralumin	אספקת מתכת בע"מ, דרך פארק, דוקינפילד. SK16 5LP בריטניה		אלומיניום מאפשר משנת 1909 ולכן ספקים חלופיים זמינים
התקנים מוגמרים מוכנים לשימוש	צור קשר עם ד"ר גודלאד r.goodlad@imperial.ac.uk		צור קשר עם r.goodlad@imperial.ac.uk לקבלת פרטי אספקה