חיסון תוך רירית של תאים סרטניים במודל מורין: הליך להקמת מודל אורתוטופי לסרטן הראש והצוואר

תקציר

מקור: Oweida, A. J. et al. חיסון תוך רירית של תאי קרצינומה של תאי קשקש בעכברים לצורך יצירת פרופיל חיסוני של הגידול והערכת תגובה לטיפול. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה, אנו מפתחים מודל אורתוטופי של סרטן ראש וצוואר על ידי חיסון תוך רירית של קו תאי קרצינומה של תאי קשקש. העכבר נושא הגידול יראה דמיון לסימפטומים רלוונטיים מבחינה קלינית של מחלה אנושית ולכן ניתן להשתמש בו כדי לחקור את התקדמות הסרטן ולגלות אסטרטגיות טיפוליות חדשניות.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הזרקת תאים לעכברים

1. הכינו תערובת של תאים ביחס של 1:1: מטריצת קרום מרתף (50 מיקרוליטר כל אחד).
2. מוסיפים תחילה את התאים; לאחר מכן, בהדרגה פיפטה את מטריצת קרום המרתף. הימנעו מהחדרת בועות אוויר. ודא כי התערובת נעשית מיד לפני הזרקת החיה. הוספת תאים למטריצת קרום המרתף לפרק זמן ממושך עלולה לגרום לתאים להתיישב בתערובת המטריצה, מה שמקשה על ניעור נמרץ של התערובת. זה יגרום לשונות ניכרת בגודל הגידול בין עכברים.
3. מערבבים בעדינות. ודא שכל השלבים הכוללים מטריצה מבוצעים על קרח. מטריצת קרום המרתף תעבור פילמור בטמפרטורת החדר.
4. הכינו מזרקים לחיסון.
5. טען מזרקי אינסולין 0.5 מ"ל (23G) עם 100 μL של תמיסת מטריצת קרום התא / מרתף.
6. שמור את המזרקים על קרח כדי למנוע פילמור מטריצת קרום מרתף.
7. מרדימים עכברים על ידי הצבתם בתא עם איזופלורן וחמצן (2.5%).
8. ודא שהעכברים מורדמים עמוקות לפני ביצוע ההזרקה (על ידי הבטחת חוסר תגובה לצביטת בוהן).
9. הכנס את המחט לאזור buccal הימני או השמאלי. פעולה זו מתבצעת דרך החלל הפתוח הזמין משני צדי הפה.
10. ודא שלשון העכבר אינה מפריעה.
    הערה: קל לדחוף את הלשון, מה שיגרום לגידולים בלשון. הזיזו את הלשון לצד השני במידת הצורך.
11. שמור את המזרק במקביל לאזור buccal בזמן בתוך חלל הפה.
12. כאשר הוא מוכן להזרקה, משוך את המזרק לאחור והכנס את המזרק באיטיות בזווית של 10°.
13. יש להזריק 100 μL של תרחיף מטריצת קרום התא/מרתף במשך תקופה של 5 שניות.
14. החזק את המזרק במקומו למשך 5 שניות נוספות כדי לוודא שכל החומר מוזרק.
    הערה: עבור עכברי ביקורת שאינם נושאים גידול, הזריקו תערובת של מדיה ומטריקס נטולי סרום (כמתואר לעיל) ללא תאי הגידול.
15. משכו את המזרק בעדינות.
16. המשך את ההליך לעיל עם העכברים הנותרים.
17. יש להמתין שבוע עד שהגידולים מתחילים להופיע בצורה גסה (50-200 מ"מ³ לתאי B4B8 ו-LY2).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
HBSS	תרמופישר סיינטיפיק	14175079	ללא סידן, ללא מגנזיום, ללא פאנו אדום
ציטומטר מסה Helois	פלואידים	נה
מטריצת קרום מטריג'ל	קורנינג	CB-40234B