קציר קרום צ'וריואלנטואי אפרוחים: שיטה לבידוד קרום כוריאואלנטואי נושא גידול מביצת תרנגולת

תקציר

מקור: Schmidt, L. B. et al. The chick chorioallantoic membrane in vivo model to assessment perineural invasion in head and neck cancer. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים את בידודו של קרום כוריאואלנטואי נושא גידול מעובר התרנגולת. ניתן להשתמש ב- CAM שנקצר ליישומים נוספים במורד הזרם.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. קצירת ה-CAM

1. הכינו צלחות 6 בארות עם 4% PFA (paraformaldehyde) pH 7.0; באר אחת לכל ביצה, 2 מ"ל לכל באר.
2. הביאו את הביצים לספסל במעבדה. באמצעות מחט המחוברת מזרק כדי לנקב את הלבשת הסרט, לזרוק סביב 300 μL של PFA מעל CAM כדי להקשיח מעט את CAM, ובכך להקל על תהליך הקציר. חזור על פעולה זו עבור כל הביצים.
3. בעזרת מספריים, הסירו את החצי העליון של קליפת הביצה (היכן שחלון ההפעלה ממוקם) כשה-CAM מחובר אליה (איור 1I). הקטינו את הגודל של חצי זה לקוטר של כ-3 ס"מ. אחזו במלקחיים עדינים ונתקו אותו מקליפת הביצה תוך הכנסתו ל-PFA.

תוצאות

איור 1: השתלת DRG, תאים וקצירת CAM: ביום 8: A. CAM נצפה בקלות לאחר הסרת קרום שעוות פרפין. ב-ג. בעזרת מלקחיים עדינים, DRG מונח על ה-CAM. D. הביצה מכוסה בהלבשת סרט ומכניסים לאינקובטור; החצים מצביעים על הפתחים המכוסים. ביום 10: E-F. הלבשת הסרט מוסרת ו- DRG ממוקם (ראש חץ על F). ג-ה. 5 μL של תמיסת תאים נופל על CAM במרחק ~ 2 מ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
PFA (תמיסת פרפורמאלדהיד)	סיגמא-אולדריץ'	# P6148-1KG	יש לדלל במים לקבלת תמיסת 4% PFA
מספריים עדינים כירורגיים ישרים וחדים	כלים מדעיים יפים (FST)	#14060-09	משמש לקצירת רקמת CAM ביום ה -17
ביצים מופרות של לוהמן לבן לגהורן			ביציות מופרות בימי הפריה מוקדמים, רצוי ביום הראשון שלאחר ההפריה. ביצים המשמשות בפרוטוקול זה הן מחוות העופות של אוניברסיטת מישיגן
מלקחיים Graefe דק במיוחד, ישר	כלים מדעיים יפים (FST)	# 11150-10	משמש להשתלת DRG על CAM ביום 8 ולקצירת רקמת CAM ביום 17