חיסון אורתוטופי של תאי סרטן בלוטת התריס לתוך בלוטת התריס מורין: הליך להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן בלוטת התריס

תקציר

מקור: Julia Ramirez-Moya, et al. In vivo עיכוב של microRNA כדי להקטין את צמיחת הגידול בעכברים. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מתאר את הליך החיסון האורתוטופי של תאי סרטן בלוטת התריס לבלוטת התריס של מודלים עכבריים, אשר עשוי לשמש פלטפורמה רבת ערך להערכת סרטן וגילוי אסטרטגיות טיפול פוטנציאליות.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. חיסון אורתוטופי של בלוטת התריס של תאים

1. הכנת תאים
   1. הנדסה של קו תאי סרטן בלוטת התריס האנושי Cal62 כדי לבטא יתר על המידה מבנה מהונדס המבטא באופן מכונן GFP ולוציפראז. בחר את התאים הטרנסגניים על ידי עמידות לאנטיביוטיקה או על ידי מיון התאים החיוביים GFP עם ציטומטריית זרימה.
   2. לגדל תאים אלה DMEM בתוספת אנטיביוטיקה (פניצילין סטרפטומיצין) ו 10% FBS ב 37 ° C ו 5% CO₂.
   3. השהה 1 x 10⁵ תאים ב 5 μL של PBS.
2. חיסון תאים לבלוטת התריס של עכברים
   1. הזריקו 100 μL של משכך כאבים (buprenorphine) ו-100 μL של אנטיביוטיקה (cephalosporin) תת עורית לעכברי BALB/c nu/nu בני 7 שבועות. יש לחטא את אתר ההזרקה באלכוהול.
   2. הזריקו 5 μL של תמיסת התא לבלוטת התריס של העכברים.
      1. מרדימים את העכבר באמצעות 3% איזופלורן מעורבב עם חמצן ומניחים אותו מתחת לסטריאומיקרוסקופ בארון זרימה סטרילי. להעריך את רמת ההרדמה על ידי רפלקס הדוושה (צביטת בוהן מוצקה) ולהתאים את מתן ההרדמה לפי הצורך כדי לשמור על מישור הניתוח.
      2. החל משחה אופתלמית על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות.
      3. עבור כל עכבר, לחטא את הצוואר עם iodopovidone ולעשות חתך של כ 2 ס"מ בעור עם מספריים. לאחר הפתיחה, לחשוף את הצוואר על ידי עקירה של בלוטות הרוק.
      4. נתחו את שרירי הרצועה באמצעות מלקחיים ו/או מספריים כדי לחשוף את קנה הנשימה ואת בלוטת התריס. באמצעות מזרק 10 μL, להזריק 5 μL של תמיסת התא לתוך לובולה בלוטת התריס הימנית, הממוקם בצד של סחוס cricoid.
      5. מקמו מחדש את בלוטות הרוק ותפרו את החתך במשי באמצעות תפרים קלועים, מצופים ולא נספגים.
      6. הוסף יודופובידון לאזור הפצע והנח את העכבר על שמיכה תרמית בזמן שהוא מתאושש מההרדמה.
   3. למחרת לאחר הניתוח, להזריק משכך כאבים תת עורית (buprenorphine) ולהוסיף 3 מ"ל של איבופרופן נוזלי (40 מ"ג / מ"ל) לתוך 250 מ"ל של מי השתייה במשך שבוע אחד.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מטריצת קרום מרתף: מטריצת קרום מרתף מטריגל ריכוז גבוה	קורנינג	#354248
מגיב משלוח in vivo: מגיב Invivofectamine 3.0	תרמו פישר	IVF3005
תוכנת הדמיה In vivo: מערכת הדמיה IVIS-Lumina II	קליפר מדעי החיים