מיצוי חוט השדרה: פרוטוקול לבידוד חוט השדרה המורין למחקרי מבחנה

תקציר

מקור: Na'ara, S. et al. מודלים חוץ גופיים של פלישה עצבית סרטנית: מודל גנגליון השורש הגבי. J. Vis. Exp. (2016)

בסרטון זה, אנו מתארים פרוטוקול שלב אחר שלב לבידוד חוט השדרה ממודל עכבר עבור מחקרי מבחנה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. קצירת חוט השדרה

1. הרדימו את העכבר באמצעות תא CO₂. הימנע נקע צוואר הרחם כפי שהוא עלול לגרום נזק שורשי גנגליון עקב כוחות גזירה. מכאן והלאה, בצע את כל השלבים בתנאים סטריליים.
2. להשרות את החיה עם 70% אתנול. שלב זה חשוב לעיקור ולמניעת גרירת השיער דרך האיברים הפנימיים.
3. השאירו את העכבר להתייבש מאתנול. למנוע כל מגע של אתנול עם האיברים הפנימיים עקב neurotoxicity.
4. לאחר ייבוש העכבר, מקם אותו באמצעות פינים במצב נוטה (עם הפנים כלפי מטה). הניחו את הפינים על כל גפה אחורית וגפה קדמית.
5. באמצעות מלקחיים, לבצע חתך קו אמצע המשתרע craniocaudally מן הצוואר האחורי אל עמוד השדרה המותני. לאחר מכן, להרים את דשי העור דו צדדית באמצעות מלקחיים ולחשוף רקמה תת עורית.
6. למשש את גולגולת העכבר עד הגעה לצומת craniocervical . בעזרת מספריים בניצב לחיה, חותכים דרך שרירי צוואר הרחם ועמוד השדרה בצומת הקרניוצווארי (חוליות^הצוואר השביעיות), באמצעות מלקחיים כבדים. מנתחים את עמוד השדרה בצורה קאודלית ומוציאים את עמוד השדרה במלקחיים כבדים עד להגעה לגובה המותני (גובה הגפיים האחוריות).
7. בצע טרנסקציה קאודלית מלאה בגובה עמוד השדרה המותני (החוליה המותנית^{החמישית}) באמצעות מלקחיים כבדים.
8. גלגל את העכבר (עם הפנים כלפי מעלה). אין צורך לכסות את החתך מכיוון שה- DRG מופק מרמות חוליות תחתונות ולא מצוואר הרחם.
9. חותכים בקו האמצע מהצוואר לבטן, מושכים את העור לרוחב ואז חותכים כדי לפתוח את הצפק.
10. הסר את האיברים הפנימיים בתוך הצפק (כבד, טחול, לבלב, קיבה ומעי) בגוש. לאחר מכן, להסיר את איברים retroperitoneal (כלומר, כליות ולבלב). גולגולתית, לפתוח את קיר החזה.
11. באמצעות מלקחיים ולהב כירורגי, לחתוך את הצלעות, משאיר 5 מ"מ של צלעות דו צדדית הרחק עמוד השדרה. בשלב זה, עמוד השדרה מופרד משאר הגוף.
12. יש לשטוף את עמוד השדרה מדם במי מלח קרים (4°C) טריים חוצצי פוספט (PBS) פעמיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מלקחיים	סיגמא-אולדריץ'	F4142
להב כירורגי	סיגמא-אולדריץ'	Z309036
מספריים	סיגמא-אולדריץ'	S3271
צלחות פטרי 35 מ"מ, תחתית זכוכית	דה גרוט	60-627860
70% אתנול	סיגמא
PBS קר	תעשיות ביולוגיות	02-023-1א