גידול סליספרות מרקמת בלוטת הרוק: שיטה לפיתוח סליספרות מתאי אפיתל שמקורם בבלוטת הרוק האנושית

תקציר

מקור: Beucler, M. J., Miller, W. E. בידוד תאי אפיתל ברוק מבלוטות רוק אנושיות לצמיחה חוץ גופית כסליספרות או מונולייזרים. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מציג את הפרוטוקול לגידול סליספרות, הספרואידים התלת-ממדיים שמקורם בבלוטות הרוק. הסליספרות יכולות לשמש גם להערכת ההשפעה של סרטן הראש והצוואר על ייצור הרוק מבלוטות הרוק של חולים אנושיים מושפעים.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.

1. עיכול רקמות

1. באמצעות צלחת תרבית רקמה בקוטר 100 מ"מ, טחנו באופן מכני את הרקמה לחתיכות עדינות בגודל ~1-2 מ"מ באמצעות מספריים ומלקחיים כירורגיים מעוקרים אוטוקלאביים (איור 1B, C). יש לחתוך את רקמת החיבור בין החלקים כדי להבטיח הפרדה נכונה וקלות בשלבים נוספים.
2. הוסף 6 מ"ל של תמיסת dispase/collagenase לרקמה הטחונה. לאחר מכן יש לדגור בטמפרטורה של 37°C למשך כ-30 דקות עד שעה אחת.
3. לשבש את הרקמה על ידי pipetting עם פיפטה סרולוגית ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
כלי תרבית 100 מ"מ	תרמו סיינטיפיק	172931
15 מ"ל צינורות חרוטיים	תרמו סיינטיפיק	339651
50 מ"ל צינורות חרוטיים	תרמו סיינטיפיק	339653
מדיה לצמיחת תאי אפיתל של הסימפונות	לונזה	CC-3171	הוסף ערכת תבליטים בהתאם להוראות היצרן. תוסף עם 20 מ"ל של סרום פחם מופשט.
מסננת תאים 70 מיקרומטר רשת ניילון	פישר	22-363-548
סרום בקר עוברי שהופשט בפחם	גיבקו	12676-029
Collagenase סוג III	וורטינגטון	LS004182	יש לאחסן בטמפרטורה של 4°C.
דיספסי	יישומים סלולריים	7923	להמיס collagenase כדי ליצור 0.15% (w/v) מניה. יש לסנן, לעקר ולאחר מכן לאחסן בטמפרטורה של -20°C.
ניתוח מספריים	פישר	08-940
פוספט דולבקו חוצץ מלוחים	קורנינג	55-031-PC
תמצית קרום מרתף PathClear	קולטרקס	3432-005-01	יש להפשיר ב-4°C לפחות 24 שעות לפני השימוש. תמיד לטפל בקרח.
שש מנות תרבות	בז	353046
מלקחיים כירורגיים	פישר	22-079-742