Patient-derived Tumor Xenografting: טכניקה ליצירת מודל עכבר ניסיוני להערכת קרצינומה של תאי השתן

תקציר

מקור: Moret, R. et al. מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט הנגזרים מהמטופל עבור קרצינומה של תאי השתן האנושיים וצמיחת גידולים בסרטן המעי הגס והחלחולת וגרורות ספונטניות. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מתאר את ההליך ליצירת מודל ניסיוני של קסנוגרפט מורין, אשר יכול לשמש לחקר התקדמות קרצינומה של תאי השתן.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. מודל עכבר UCC

1. הכנת עכברים להליך
   1. השג עכבר NOD/SCID נקבה בת 6 עד 8 שבועות. יש לגלח את הגב התחתון של העכבר באמצעות קרם להסרת שיער. מרדימים את העכבר בתא אינדוקציה עם איזופלורן (2.5% ב-100% חמצן, 1 ליטר/דקה).
   2. לאחר ההרגעה, הניחו את העכבר במצב שכיבה עם חוטמו בחרוט אף איזופלורני וגב יחף מקורקע היטב על אלקטרודה מתפזרת.
      הערה: העכבר מורדם לחלוטין אם אינו מגיב לצביטה בבוהן.
2. קח את תאי הגידול UCC שנקטפו והשהה אותם מחדש במדיה של 50 μL RPMI. להחדיר את תאי UCC לשלפוחית השתן באמצעות אנגיוקטטר (איור 1Aa, Ab).
   1. הגדר מכונת electrocautery מונופולרית ולהגדיר אותו להספק של 4 W. לשמן אנגיוקטטר סטרילי 24 G עם ג'לי סיכה ולהכניס אותו דרך השופכה של העכבר הנקבה.
      הערה: התנגדות קלה עשויה להיות מורגשת. בעדינות לדחוף קדימה או להסיר את האנגיוקטטר ולחזור על הפעולה. אין להכריח. אם הצנתר מתכופף בכניסה, הכנס חוט מנחה סטרילי באמצע הדרך לתוך הצנתר כדי לספק יציבות.
   2. הכנס במלואו את חוט המנחה הישר בעל הליבה הקבועה בגודל 0.025 אינץ' 1 מ"מ מעבר לקצה האנגיוקטטר.
      הערה: החוט מסומן בסרט דבק לפני ההליך כדי לציין את נקודת העצירה של 1 מ"מ ולהבטיח עקביות.
   3. החזיקו את סיכת המונופולר על חוט ההנחיה למשך שנייה אחת, מה שמאפשר גירוי חשמלי של רירית שלפוחית השתן.
   4. חבר אנגיוקטטר סטרילי טרי למזרק Luer-Lok 1 סמ"ק וצייר 200 μL של תאים שנאספו.
      הערה: לפחות 100 μL הולך לאיבוד מן האנגיוקטטר אל המזרק. פצה על נפח אובדן בעת חישוב נפח תרחיף התא הדרוש.
   5. הסר חוט מנחה ואנגיוקטטר מהשופכה של העכבר. הכנס אנגיוקטטר עם מזרק של תאים מחובר לתוך השופכה.
      הערה: ההתקדמות צריכה להיות קלה יותר מבעבר.
   6. להחדיר 50 μL של תאים לתוך שלפוחית השתן של העכבר. המתן מספר שניות לפני הסרת האנגיוקטטר כדי לאפשר לתאים להיצמד לדופן שלפוחית השתן.
      הערה: תאים נשארים בשלפוחית השתן ומתפתחים לגידול ראשוני.

תוצאות

איור 1: מודלים אורתוטופיים של עכברי UCC. (אא) אנגיוקטטר הוכנס לשלפוחית השתן של עכבר NOD/SCID נקבה והוחל שוק חשמלי על דופן שלפוחית השתן באמצעות חוט מנחה. (אב) תאי גידול UCC מתויגים, BlCaPt15 (2 x 10⁴ תאים), או BlCaPt37 (5 x 10⁵ תאים) עם תוספת של 3 x 10⁵ LN תאי HK סטרומה, הוחדרו לשלפוחית העכבר NOD/SCID דרך האנגיוקטטר.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קרם להסרת שיער	כנסייה & Dwight ושות', Inc	1(800)248-8820
איזופלורן	הנרי שיין בריאות בעלי חיים	108333
עכברי NOD/SCID בני 6-8 שבועות (נקבה)	מעבדת ג'קסון	1303
מלקחיים	סימטריה כירורגית בע"מ	06-0011
גנרטור אלקטרוכירורגי	ואלילאב	FORCE1C20
תא אינדוקציה איזופלורן	פרקין אלמר	119038