הכנת כליה של חולדה דה-צלולרית: הליך ליצירת פיגום אצלולרי של איברים שלמים מכליות חולדה שנקטפו

תקציר

מקור: Kim, E. H. et al. הכנת פיגומים כליה Decellularized בחולדות. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מתאר את ההכנה של כליה של חולדה שעברה דה-צלולריזציה. פיגום כלי הדם האצלולרי המתקבל יכול לשמש פלטפורמה מבטיחה להנדסת רקמות של שתלי איברים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. קצירת כליות ודה-צלולריזציה

1. לקצור את הכליה השמאלית עם אבי העורקים הבטני ואת נבוב הווריד הנחות.
2. קשרו את השופכן, אבי העורקים החזי, הווריד הנבוב העליון וענפים של אבי העורקים הבטני.
3. שמור את האיבר hydrated ב PBS של Dulbecco (DPBS) בצלחת פטרי 10 ס"מ.
4. לערבב את אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנבוב התחתון עם קטטר 23G. כדי להסיר שאריות דם, חבר את הצינורית עם משאבה פריסטלטית ושטוף עם DPBS (500 מ"ל) ו 16 U / mL הפרין במשך 90 דקות בקצב של 5 סל"ד ב 37 ° C.
5. כדי decellularize הכליה, לנקב את הכליה עם 1% Triton X-100 (1 L) במשך 3 שעות ולאחר מכן עם 0.75% נתרן דודציל סולפט (SDS) פתרון (2 L) במשך 6 שעות בלחץ קבוע של 40 mmHg.
   הערה: הכליה תהפוך לשקופה לאחר 8 שעות.
6. כדי להסיר שאריות SDS, יש לנקב את הדגימה עם 1% פניצילין במים מזוקקים (6 ליטר) למשך 18 שעות (למשך הלילה) ולאחר מכן עם DPBS סטרילי (500 מ"ל) ו-16 U/mL הפרין למשך 90 דקות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צינורות פוליאתלין 50, צינורות קטטר 100 ft	בריינטרי סיינטיפיק	.023" × .038"
3-0 גישה / קשירה של כלי דם מסליל משי בחולדה	בריינטרי סיינטיפיק	SUT-S 110
מספריים עדינים לחיתוך פאשיה/ רקמת חיבור	כלים מדעיים משובחים	14058-09
מחט מדריך 25 אינץ '(עבור קטטרים וסקולריים)	בקטון דיקינסון	305145
מלחציים לכלי הדם של שוורץ	כלים מדעיים משובחים	18052-01 (ישר)
5-0 גישה / קשירה וסקולרית של סליל משי בעכבר	בריינטרי סיינטיפיק	SUT-S 106