הכנת בלוקים ספרואידים סרטניים על ידי הקפאת בזק: הליך לשימור ספרואידים סרטניים בגושי מטריצה קפואים

תקציר

מקור: Wang, Y. et al. 3-D מערכת תרבית תאים לחקר פלישה והערכת טיפולים בסרטן שלפוחית השתן. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את הכנת בלוקי הספרואידים הסרטניים על ידי הקפאת הבזק, טכניקה שבה דגימת רקמה מעניינת קפואה לטמפרטורה קרה במיוחד, ומרסנת את הספרואידים בתוך המטריצה.

פרוטוקול

1. הכנת בלוק דגימה המכיל ספרואידים סרטניים לחיתוך רקמות קפואות

1. הרימו בזהירות את גוש ג'ל הקולגן והספרואידים ממגלשות התא באמצעות מלקחיים קטנים. מניחים את גוש ג'ל הקולגן בתבנית היסטולוגיה פלסטית.
2. שטפו את ג'ל הקולגן עם 1x PBS לזמן קצר ולאחר מכן תקנו אותו עם 4% פרפורמאלדהיד (PFA) ב-PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.
   הערה: PFA הוא מסרטן פוטנציאלי ויש לטפל בו בזהירות.
3. שטפו את ג'ל הקולגן עם 1.5 מ"ל של 1x PBS על שייקר למשך 15 דקות. החליפו את PBS וחזרו על שלב הכביסה הקודם 3x.
4. יש למרוח שכבה דקה (כ-3 מ"מ) של תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) כדי לכסות את תחתית תבנית היסטולוגיה פלסטית חדשה. הניחו את ג'ל הקולגן הקבוע והשטוף על גבי תרכובת OCT, ולאחר מכן הטמיעו בזהירות את הג'ל כולו על ידי מילוי התבנית בתרכובת OCT תוך הימנעות מהיווצרות בועות אוויר ב- OCT.
5. השאירו את התבנית על 4 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת.
6. מניחים את התבנית המכילה את הדגימה ותרכובת OCT על צלחת פטרי 100 מ"מ צפה על חנקן נוזלי. אפשר לדגימה לקפוא לחלוטין.
7. אחסנו את גוש הדגימה הקפוא בטמפרטורה של -80°C לשימוש עתידי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מדיום תרבית תאי DMEM	תרמו פישר סיינטיפיק	11995065
סרום בקר עוברי	תרמו פישר סיינטיפיק	26140079
אנטיביוטיקה-אנטי-מיקוטית (100x)	תרמו פישר סיינטיפיק	15240062
אלבומין בסרום בקר (BSA)	סיגמא-אולדריץ'	A3803
מלח חוצץ פוספט (PBS), pH 7.4	תרמו פישר סיינטיפיק	10010023
קולגן מסוג 1 מזנב חולדה, high ריכוז	קורנינג	354249
Nunc Lab-Tek II Chambered זכוכית כיסוי	תרמו פישר סיינטיפיק	155382
פתרון Paraformaldehyde	מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים	15710
מתחם O.C.T	תרמו פישר סיינטיפיק	23730571