$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. עיבוד רקמות ובידוד תאים צינוריים ראשוניים
- מוציאים את כמוסות הכליה ואת המדולה, טוחנים את שתי הכליות לחתיכות זעירות, ודגרים עליהן ב -10 מ"ל של חיץ עיכול בתנור של 37 מעלות צלזיוס עם סיבוב עדין למשך 5 דקות.
- הסר רקמות כליות לא מעוכלות על ידי העברת החיץ דרך מסנן של 70 מיקרומטר. הוסף 10 מ"ל של מדיה תרבותית כדי לעצור את העיכול.
- כדי לאסוף תאים צינוריים, צנטריפוגו את תרחיף התא המסונן ב 50 x גרם במשך 5 דקות כדי לאסוף את הגלולה הראשונה. מעבירים את הסופרנאטנט לצינור חדש ומוסיפים 5 מ"ל של אמצעי תרבית, צנטריפוגו אותו ב 50 x גרם במשך 5 דקות כדי להבטיח שכל התאים הצינוריים נאספים לתוך הגלולה השנייה. הצנטריפוגה נמצאת במהירות נמוכה יותר ומיועדת בעיקר לצינוריות כבדות. מאוחר יותר, לאחר שהתאים מתאוששים מהבידוד, התרבית הצינורית הטהורה עוברת צנטריפוגה במהירות גבוהה יותר במהלך תת-התרביות.
- השהה מחדש את הגלולה הראשונה ב 20 מ"ל של מדיה תרבותית וצנטריפוגה אותו ב 50 x גרם במשך 5 דקות כדי לאסוף את הגלולה השלישית.
- השהה מחדש את הכדורים השני והשלישי ב 1 מ"ל של מדיה תרבותית. ערבבו 10 μL של תרחיף התא עם 10 μL של Trypan Blue, טענו את התערובת לתא A של שקופית ספירה, ורשמו את כדאיות התא ממונה התאים האוטומטי.
- זרעו עד 107 תאים (אוכלוסייה הטרוגנית) על צלחת אחת בקוטר 60 מ"מ מצופה מראש בקולגן ותנו לתאים הצינוריים להיצמד למשך הלילה.