חומצה תקופתית Schiff או PAS צביעה: שיטה להעריך את העיוותים המבניים של glomerulus

1. כתם חומצה תקופתית שיף (PAS)

הערה: כתם PAS ידגיש את קרומי המרתף של לולאות נימים גלומרולריות ואת האפיתל הצינורי. הוא מאפשר הדמיה מפורטת של התאים הגלומרולריים, מטריצה מסנגיאלית והתרחבות פוטנציאלית, ושינויים פוטנציאליים של GBM (כלומר, עיבוי ואי סדירות).

1. חתכו את קליפת הכליה המשובצת בפרפין וקבועה ב-PFA באמצעות מיקרוטום בעובי 5 מיקרומטר על שקופיות מצופות פולי-L-ליזין. יבש ב 37 ° C במשך 1 שעה. ודא שהקטע אינו מכיל קפלים או חורים, שיכולים לעוות את המורפולוגיה מתחת למיקרוסקופ.
2. נטרלו את השימוש בשקופיות על ידי דגירה פעמיים בקסילן (זהירות, גירוי; יש להשתמש בארון האדים) למשך 3 דקות כל אחת, פעמיים ב-100% EtOH למשך 3 דקות כל אחת, ולאחר מכן פעם אחת ב-95%, 70% ו-50% EtOH למשך 3 דקות כל אחת, והכל בטמפרטורת החדר. יש לייבש מחדש את השקופיות ב-dH₂O.
3. יש לדגור על השקופיות בתמיסת חומצה תקופתית (זהירות, מגרה; יש להשתמש בארון האדים) (1 גרם/ד"ל) למשך 5 דקות, ולאחר מכן לשטוף את השקופיות במספר שינויים של dH₂O. יש להשתמש במיכל עם 100 מ"ל dH₂O בטמפרטורת החדר.
4. יש לדגור על שקופיות בריאגנט של שיף (Parasoaniline HCl 6 גרם/ליטר ונתרן מטאביסולפיט 4% ב-HCl 0.25 mol/L) למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. שטפו מגלשות במי ברז זורמים למשך 5 דקות.
5. יש להכתים נגד עם Hematoxylin למשך 3 שניות לפני שטיפה יסודית של מגלשות במי ברז זורמים למשך 15 דקות.
   הערה: אופטימיזציה מסוימת עשויה להידרש כדי לקבוע את הזמן האופטימלי עבור צביעת Hematoxylin.
6. התייבש שקופיות באמצעות החלק האחורי של פרוטוקול deparaffinization. סיים עם xylene.
7. יש לייבש את המגלשות באוויר ולהרכיב באמצעות אמצעי הרכבה מבוססי קסילן.
8. תמונה במיקרוסקופ אור בהגדלה של 400X להערכת מבנים גלומרולריים. להעריך את הדברים הבאים: עיבוי ואי סדירות של GBM, קריסה של לולאות נימיות, רקמה פיברוטית, טרשת נפוצה, התפשטות תאים (אנדותל, פודוציטים, ותאים מזנגיאליים, או דלקתיים החודרים לציצית).
   הערה: להערכה מקיפה של פתופיזיולוגיה גלומרולרית, יש להעריך נגעים במקומות אחרים בכליה, כגון בצינוריות.