מודל תאי גזע גליומה מתויג לוציפראז: שיטה בתיווך לנטיוירוס להכנת תאי גזע גליומה מתויגים לוציפראז למחקרים טיפוליים במבחנה

תקציר

מקור: Hu, Z. et al. זרימת עבודה מהירה לסינון כדי לזהות טיפול משולב פוטנציאלי עבור GBM באמצעות תאי גזע גליומה שמקורם במטופל. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים את הקמתם של תאי גזע גליומה מתויגים בלוציפראז באמצעות העברת גנים בתיווך לנטיוירוס. לוציפראז פועל כגן עיתונאי ומסייע להקל על ניסויים מהירים בסינון תרופות.

פרוטוקול

1. הכנת GSCs מתויגים לוציפראז

1. התחל עם תרבית GSCs וצנטריפוגה ב 70 x גרם במשך 3 דקות בטמפרטורת החדר.
2. הסר את supernatant ולעכל את התאים עם accutase במשך 4 דקות ב 37 ° C. השתמש 200 μL קצה פיפטה שוב ושוב כדי לנתק ולהשעות מחדש את גלולת התא.
3. מדללים את התאים ל 2 x 10⁵ תאים לכל באר בצלחת תרבית של 12 בארות ותרבית את התאים במשך הלילה.
4. הוסף 30 μL luciferase-EGFP וירוס supernatant (titer >10⁸ TU / mL) לתוך כל באר בצלחת ולאחר מכן צנטריפוגה את התאים ב 1,000 x גרם במשך 2 שעות ב 25 ° C. תרבית את התאים במשך הלילה.
5. רעננו את המדיום למחרת ותרבו את התאים במשך 48 שעות נוספות.
6. התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לאשר את המראה של תאים חיוביים GFP.
7. השתמש בממיין תאי זרימה כדי למיין ולבחור את GSCs עם פלואורסצנטיות GFP גבוהה כדי לגדל את התאים עוד יותר.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
B-27	גיבקו	17504-044	פי 50
EGF	גיבקו	PHG0313	20 נ"ג/מ"ל
FGF	גיבקו	PHG0263	20 נ"ג/מ"ל
גלוטה מקס	גיבקו	35050061	פי 100
נוירובזל	גיבקו	21103049	פי 1
פניצילין-סטרפטומיצין	הייקלון	SV30010	P: 10,000 יחידות/מ"ל S: 10,000 מ"ג/מ"ל
נתרן פירובט	גיבקו	2088876	100 מ"מ