כריתת גידול מונחה פלואורסצנטיות והשתלת פיגום זרעי MSC במודל מורין: הליך כירורגי להעברת תאי גזע מזנכימליים טיפוליים לחלל כריתת גידול במוח במודל עכבר

תקציר

מקור: Sheets, K. T. et al. כריתה מונחית תמונה של גליובלסטומה והשתלה תוך גולגולתית של פיגומים טיפוליים מזרעי תאי גזע.J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מציג את ההליך הכירורגי לכריתה מונחית הדמיה של גידול והשתלת פיגום ביולוגי עם תאי גזע מזנכימליים מהונדסים גנטית או MSCs המבטאים ליגנד הקשור לגורם נמק גידולי אפופטוזיס או TRAIL. MSCs טיפוליים אלה הם בעלי פוטנציאל בטיפול בגידולי מוח.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. כריתה מונחית פלואורסצנטיות והשתלת פיגומים

NOTE: יש לעקר את כל הכלים לפני אתחול הניתוח.

1. מקם את המסגרת הסטריאוטקסית על הבמה של פלואורסצנטיות המנתחת סטריאומיקרוסקופ.
2. מרדימים את העכבר תחת איזופלורן בשאיפה בתא אינדוקציה. לאחר ההרדמה, אבטח את העכבר במסגרת הסטריאוטקסית עם אספקת הרדמה רציפה בשאיפה באמצעות מתאם חרוט אף איזופלורן. שמור על טמפרטורת הגוף עם כרית חימום ו / או בדיקה.
   הערה: 4-5% איזופלורן מתאים לאינדוקציה ו-2-3% מתאים לתחזוקה, אך יש להתאים ולנטר זאת לכל עכבר.
3. החל משחה אופתלמית על העיניים כדי למנוע התייבשות של הקרנית. לעקר את אזור החתך של הקרקפת עם סדרה של שלושה אלכוהול ושלושה מגבוני בטאדין.
4. בצע בדיקת רפלקס צביטת בוהן על כל איבר ואשר תגובה שלילית כדי להבטיח הרדמה נאותה. יש להקפיד על קצב נשימה יציב של כ-55-65 נשימות לדקה.
5. בעזרת מלקחיים, צבטו והרימו בעדינות את הקרקפת. בצע חתך רוסטרלי-קאודלי ליניארי בקו האמצע עם מספריים כירורגיים. השקו את אזור החתך עם PBS והסירו שומן תת עורי עם אפליקטור קצה כותנה בתנועת הברשה סיבובית. סדרו את העור כך שחלון הגולגולת שהוקם בעבר גלוי במלואו.
6. נקבו בעדינות את הדורה רק בפנים לגבולות חלון הגולגולת באמצעות מחט 18G. חזור על הפעולה עד שהחתך עוקב באופן מלא אחר פנים החלון.
7. הסר את הדורה על ידי קילוף אותו באמצעות מלקחיים עדינים, חושף את פרנכימה הבסיסית ואת הגידול.
8. אתר את הגידול U87 mCh-Fl על ידי כיבוי אורות החדר והפעלת מצב הפלואורסצנטיות של המיקרוסקופ. התכוננו לכריתה על ידי העמסת קצה פיפטה 1-200 מיקרוליטר לקצה הצינור של משאבת ואקום.
9. הפעל את משאבת הוואקום. כריתת הגידול על ידי שאיפה עדינה של רקמה פלואורסצנטית עד שלא נשאר אות. כבו את משאבת הוואקום והשליכו את קצה הפיפטה. כבו את הפלואורסצנטיות ואורות החדר נדלקו שוב.
   הערה: כדי לשלוט בדימום, השקו עם PBS קר והפעילו לחץ יציב עם מוליך קצה כותנה. במקרים חמורים יותר, חלל הכריתה יכול גם להיות ארוז באופן זמני עם חומר המוסטטי כל עוד הוא מוסר לאחר הדימום פסק ואחריו השקיה נוספת PBS.
10. מיד לפני ההשתלה, טבלו באיטיות פיגום PLA מזרעי MSC ב-PBS כדי להסיר מדיה לא רצויה ורכיבים נלווים. השתילו את הפיגום בחלל הכריתה. במידת הצורך, הוסף 1 מיקרוליטר פיברינוגן (67-106 מ"ג/מ"ל) ואחריו 1 מיקרוליטר תרומבין (400-625 U/mL) כדי לאבטח את הפיגום במקומו.
11. כאשר הדורה מוסרת ודש העצם מחלון הגולגולת כבר מושלך, אוטמים את הפצע פשוט על ידי סגירת העור ומריחת דבק כירורגי. הסר את בעל החיים מהרדמה בשאיפה ואפשר להתאושש על משטח מחומם.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
רק עבור מכשיר סטריאוטקסי עכבר	סטולטינג	51730	שומר על מיקום ראש יציב במהלך הניתוח
פלואורסצנטיות מנתחת סטריאומיקרוסקופ	לייקה	M165 FC	מאפשר הדמיה בזמן אמת של הגידול במהלך כריתה
דבק רקמות Vetbond	3 דקות	1469	דבק סוגי לסגירת פצע בעור
דמעות מלאכותיות	אקורן	664268	מונע התייבשות של העיניים במהלך הניתוח
Webcol אלכוהול מכין	קובידיאן	6818	עיקור אתר החתך
פילינג כירורגי בטדין	חברת Purdue Fredick	6761815117	עיקור אתר החתך
אפליקטורים עם קצוות כותנה	פישרברנד	23-400-115	כלי ניתוח
מערכת שאיפת E-vac	ארגוס	EV310	משאבת ואקום המשמשת לכריתת הגידול
פיברינוגן ותרומבין שהופקו מ-TISSEEL כפי שהתקבל	בקסטר		לאבטחה זמנית של הפיגום בחלל הכריתה