טומוגרפיה מולקולרית פלואורסצנטית: טכניקת הדמיה עבור הדמיה In vivo של גליובלסטומה מתויגת חלבון פלואורסצנטי Xenografts במודל עכבר

תקציר

מקור: Benitez, J. A. et al., טומוגרפיה מולקולרית פלואורסצנטית עבור הדמיה In Vivo של גליובלסטומה Xenografts. J. Vis. Exp. (2018)

בסרטון זה, אנו מתארים טומוגרפיה מולקולרית פלואורסצנטית או FMT עבור הדמיה in vivo של גליובלסטומה מתויגת חלבון פלואורסצנטי xenografts במודלים עכבריים. הטכניקה שימושית להבהרת ההשפעות של טיפולים נגד גידולים ברמה המולקולרית.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1.FMT הדמיה

הערה: על פי מטרת הניסוי, ניתן לנטר את תאי הגליובלסטומה המתויגים ב- iRFP in vivo לפני, במהלך או אחרי הטיפול. למטרות הדמיה, יש להרדים בעלי חיים באמצעות תא אינדוקציה איזופלוראני, לשמור בקלטת הדמיה במהלך הסריקה, ולצלם בתחנת העגינה של מכשיר ההדמיה FMT.

1. הוציאו את בעל החיים מהכלוב והניחו בתא האינדוקציה איזופלורן. סגרו את התא והפעילו את זרימת החמצן והוופורייזר ל-3-5%.
2. עקוב אחר בעל החיים עד שהוא מורדם לחלוטין, בדרך כלל תוך 1-2 דקות. בעלי חיים חסרי הכרה לא צריכים להגיב לגירויים חיצוניים.
3. הוציאו את בעל החיים המרדים מהחדר והכניסו את בעל החיים לקלטת ההדמיה על ידי הנחת מתאם הראש תחילה, ולאחר מכן הנחת בעל החיים עם הפנים כלפי מטה. ודא שהראש ממוקם במרכז הקלטת.
4. מניחים את הצלחת העליונה של הקלטת למעלה ומהדקים את ידיות הכוונון עד 17 מ"מ.
5. לאחר שבעל החיים מאובטח בקלטת ההדמיה, המשך להדמיה על ידי הכנסת הקלטת לתחנת העגינה הפנימית של מכשיר ההדמיה FMT, שם נשאב האיזופלורן כדי לשמור על בעל החיים מורדם.
6. הפעל את תוכנת ה- imager והמנתח על-ידי לחיצה כפולה על סמל התוכנה.
7. בחלון "ניסוי" הכרטיסייה, בחר את "מסד נתונים" ו "קבוצת מחקר".
8. עבור אל החלון "סריקה הכרטיסייה" ובחר את הנושא לתמונה על ידי לחיצה על "בחר נושא". כמו כן, בחר את ערוץ הלייזר בחלונית "ערוץ לייזר". עבור תאים המסומנים בתווית FP635, בחר "ערוץ לייזר 635 ננומטר", ועבור תאים המסומנים בתווית FP720, בחר "ערוץ לייזר 680 ננומטר".
9. רכוש תמונה על ידי לחיצה על האפשרות "לכידה" בחלון "סריקה הכרטיסייה". לאחר מכן, התאם את שדה הסריקה על-ידי לחיצה וגרירה של שדה הסריקה בתמונה שצולמה למספר מוגדר של מיקומי מקור, בדרך כלל בטווח של 20-25 מקורות עבור הצד האיפסילטרלי.
10. בדוק את האפשרות "הוסף לתור השחזור" ולחץ על "סריקה" בחלון "סריקה".
11. המתן עד להשלמת הסריקה ולאחר מכן הסר את קלטת ההדמיה מתחנת העגינה.
12. הסר את הצלחת העליונה של הקלטת והחזיר את בעל החיים לכלוב.
13. חזור על שלבים 1.1-1.12 עבור שאר בעלי החיים.

2. ניתוח תמונות

1. מתוך תוכנת imager ו מנתח, בחר את "הכרטיסייה ניתוח" חלון.
2. טען את ערכת הנתונים ואת הנושא לניתוח על ידי לחיצה על כפתור "+" בחלונית "בחירת ערכת נתונים" בחלון "ניתוח הכרטיסייה".
3. לאחר טעינת התמונה בחלון "כרטיסיית ניתוח", בצע את ניתוח אזור העניין (ROI) על ידי בחירת סמל האליפסואידים, הממוקם בפינה השמאלית העליונה של חלון "כרטיסיית ניתוח".
4. התאם את הסף לאפס בחלונית "נתונים סטטיסטיים" על ידי לחיצה ימנית על העמודה "סף" בחלון "ניתוח הכרטיסייה".
5. הערך הכולל בלוח "נתונים סטטיסטיים" מייצג את האות מתאי גליובלסטומה מתויגים פלואורסצנטיים המושתלים במוח העכבר.
6. חזור על שלבים 2.2-2.4 עבור שאר בעלי החיים. טען או הסר נושא חדש על ידי לחיצה על הלחצן "+" או "−", בהתאמה, בחלונית "בחירת ערכת נתונים" בחלון "ניתוח הכרטיסייה".

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מערכת טומוגרפיה פלואורסצנטית	פרקיןאלמר	FMT 2500 XL
תוכנת הדמיה TrueQuant	פרקין אלמר	7005319
עכברים עירומים אתימיים	מעבדות נהר צ'ארלס	קוד זן 490 (הומוזיגוט)	אישור מראש של המוסד<בר/> תוכנית טיפול בבעלי חיים ועל ידי הוועדה המוסדית לבטיחות ביולוגית חובה.