$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. מיצוי עצב סיאטי
- קח עכברים שהעצבים הסיאטיים שלהם הוזרקו בעבר עם תאים סרטניים והרדימו אותם עם CO2. הניחו את העכבר על צדו הגחוני וייצבו את הגפיים הדיסטליות באמצעות פינים.
- הסר את העור בצד הגבי של האיבר המוזרק ופלג הגוף העליון.
- באמצעות דיסקציה קהה, לחשוף את העצב הסיאטי עמוק לתוך השרירים.
- מסלולי העצבים בין האיליום לעצה. כדי לקבל גישה לעצב באזור חוט השדרה, להפריד בין שתי העצמות. ראשית, הכנס מספריים סגורים באזור הצר שבו נמצא העצב הסיאטי, ולאחר מכן פתח את המספריים תוך כדי החזקת העכבר. להיות עדין ולשמור על שלמות העצב הסיאטי במהלך הדיסקציה.
- יש לנתח בזהירות את העצב הסיאטי עד קצה עצם הירך ובסמיכות לחוט השדרה.
הערה: עצבים פולשים הם שבירים ביותר ונוטים להישבר תחת מתח או טיפול כוחני.
- קצרו את העצב על ידי חיתוך הקצה הדיסטלי שלו. בזהירות להרים את העצב תוך שחרורו מרקמה סמוכה. חתכו את העצב בקצה הפרוקסימלי, קרוב ככל האפשר ליציאתו מעמוד השדרה.
- תעד אז את אורך הפלישה ברוטו באמצעות קליפר ורנייה. הערכה מקרוסקופית זו היא אינדיקציה בלבד.
2. עיבוד וכימות עצבי
- הטמע את העצב המנותח בתרכובת OCT. הקפידו למקם את העצבים בצורה אורכית ושטוחה ככל האפשר בתחתית התבנית.
- ציין על הקלטת את הצד הפרוקסימלי והדיסטלי של העצב על ידי סימון האות P (פרוקסימלי) ו- D (דיסטלי).
- הניחו עצבים מוטבעים על גבי קרח יבש, אם הם לא נחתכו מיד. הדגימה יכולה להישמר ב -80 ° C במשך מספר שבועות.
- חתכו דגימות באמצעות מיקרוטום Cryostat בעובי 5 מיקרומטר והניחו חלקים על שקופיות זכוכית. במידת האפשר, התאימו שני חלקי עצבים לכל שקופית. ציין צד פרוקסימלי של העצב.
- הכתמת שקופיות באמצעות צביעת H&E.
- סרוק באופן דיגיטלי קטעי עצבים מוכתמים באמצעות סורק שקופיות המספק נתונים דיגיטליים ברזולוציה גבוהה.
- באמצעות תוכנת הדמיה, כמת את משך הפלישה על ידי לחיצה על לחצן מדידת מרחק, אזור הפלישה או פרמטרים רצויים אחרים. להערכה טובה של משך הפלישה, השתמש במקטעים מרובים (2 עד 4) של אותו עצב.