$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הכנת עכברים להזרקת תאי גידול
- מרדימים עכבר על ידי הזרקה תוך צפקית (כלומר ) של קוקטייל קטמין/קסילזין (קטמין 100 מ"ג/ק"ג, קסילזין 10 מ"ג/ק"ג).
- יש לאשר הרדמה מלאה על ידי צביטת רגלי בעל החיים ולהבחין בחוסר תגובה.
- הניחו את העכבר על צלחת זכוכית (המשמשת ליציקת ג'ל חלבון) והדקו בגומיות.
- במידת הצורך, יש להסיר את שיער הצוואר על ידי גילוח או מריחת כמות קטנה של מוצר להסרת שיער וניגוב השיער במגבת נייר.
הערה: אם אתם משתמשים בעכברים עירומים, דלגו על שלב זה מכיוון שאין להם שיער גוף.
- נקו את עור הצוואר על ידי מריחת פובידון-יוד ו-70% אלכוהול.
- הניחו את העכבר על במת המיקרוסקופ המנתח
- בצע חתך בעור ~ 1 ס"מ אורך עם אזמל כירורגי.
- נתחו בבוטות את השריר בעזרת מלקחיים עם שיניים כדי לחשוף את עורק התרדמה שמתחתיו.
- להפריד את עורק התרדמה מן העצב התועה הסמוך עם מלקחיים כירורגיים.
- בעזרת מלקחיים כירורגיים, מפרידים מעט כותנה מכדור צמר גפן, מרטיבים ומעצבים לכדור צמר גפן קטן יותר. הניחו את כדור הצמר גפן הלח מתחת לעורק התרדמה של אתר ההזרקה המיועד.
- מניחים תפר דיסטלי ופרוקסימלי לכדור הצמר גפן ויוצרים קשרים רופפים. הדקו את הקשר הפרוקסימלי כדי לחסום את זרימת הדם לאתר ההזרקה.
- המשך להזרקת תאים סרטניים אם עורק התרדמה על כדור הצמר גפן נראה בלחץ מלא עם דם אדום טרי.
2. הזרקת תאים סרטניים לעורק התרדמה
- מערבלים ומושכים 100 מיקרוליטר של תאים סרטניים לתוך המזרק.
- מתחת למיקרוסקופ המנתח, הכנס באיטיות את מחט 31G (עם שיפוע כלפי מעלה) לתוך לומן של עורק התרדמה היושב על גבי כדור הצמר גפן.
- להזריק לאט את התאים מן המזרק לתוך עורק התרדמה. הזרקה מוצלחת ניתן לראות תחת המיקרוסקופ על ידי שינוי הצבע של כלי הדם והשרירים הסמוכים כאשר תאים סרטניים חוצצים נדחפים לתוך מחזור הדם.
- כאשר ההזרקה של כל נפח הושלמה, להרים את עורק התרדמה הדיסטלי בעדינות כדי למנוע regurgitation.
- הדקו במהירות את הקשר הדיסטלי כדי להשלים את תהליך ההזרקה.
- לאחר השלמת ההזרקה, הדקו את הליגטורות וקצצו את תפר המשי העודף עם מיקרו-מספריים תחת המיקרוסקופ המנתח. הזז לאחור את השריר המופרד כדי לכסות את אתר הפצע. יש לסגור את העור עם שני סיכות.
3. התאוששות כירורגית
- העבר את בעל החיים המנותח לכרית חימום להתאוששות. ייתכן שיחלפו 30-60 דקות עד שבעלי החיים יחזרו להכרתם. בינתיים, לתת buprenorphine (0.05 מ"ג / ק"ג) באמצעות הזרקה תת עורית כמו משככי כאבים לאחר הניתוח.
הערה: יש לספק שיכוך כאבים בהתאם לפרוטוקול המקומי שלך שאושר על ידי IACUC.
- ברגע שבעלי החיים מתעוררים וחוזרים להתנהגותם הרגילה, החזירו את העכברים למקום מגוריהם. לספק לעכברים מזון ג'ל במשך מספר ימים לאחר הניתוח. שמור תיעוד כירורגי ושמור אותו בחדר.
4. לא פולשני In Vivo Imaging
- עבור תאים המסומנים עם מבנים כתב luciferase, למדוד את יעילות הזרקת תאים סרטניים באמצעות מערכת הדמיה in vivo.
הערה: הדמיה אינה מבוצעת ביום ההזרקה כדי למנוע לחץ מוגזם על חיות מחקר.