בידוד נוירונים בחוט השדרה: הליך שיפוע צפיפות לבידוד נוירונים בעמוד השדרה בילודים למחקרי מבחנה

סיכום

[הכנס FIGURE1 כאן]

איור 1: עמוד השדרה מנותח וחוט השדרה שוחרר מעכבר יילוד בן 3 ימים. החץ ב-(a) מצביע לכיוון הקצה הקאודלי של עמוד השדרה, שם מוחדרת מחט כדי לשחרר את חוט השדרה. חוט שדרה משוחרר (b) מוצג שקוע ב-PBS.

[הכנס FIGURE2 כאן]

איור 2: שיפוע צפיפות, עם תוספת תאים לאחר צנטריפוגה. השכבות מתוארות ומומחישות טוב יותר על תיאור הקריקטורה. השכבה השטחית ביותר (0) היא בדרך כלל פסולת מרקמת חוט השדרה. שכבה 1 עשירה באוליגודנדרוציטים ואסטרוציטים. שכבות 2 ו-3 מכילות את רוב תאי העצב. בעוד שכבה 3 מכילה תאי עצב עם הטוהר הגבוה ביותר, כמה תאים תומכים (כלומר, אסטרוציטים ואוליגודנדרוציטים) נמצאים בשכבה 2. הגלולה בתחתית מכילה בעיקר תאי מיקרוגליה.

תקציר

מקור: Eldeiry, M. et al. בידוד ותרבית של נוירוני חוט השדרה מעכברים ילודים. J. Vis. Exp. (2017)

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול שלב אחר שלב לבידוד נוירונים בעמוד השדרה מעכבר יילודים לצורך מחקרי מבחנה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. קצירת חוטי שדרה

הערה: כל המכשירים צריכים להיות autoclaved (135 ° C ו 30 psi עבור 4 x 7 דקות מחזורים) עבור סטריליות.

1. הרדימו גורי עכברים C57BL/6 בני 1-3 ימים בתא עם איזופלורן. המתן 30 שניות לאחר הפסקת התנועה וצבט את הרגל כדי לאשר חוסר תגובה.
2. להפריד את הראש מהגוף באמצעות מספריים, עם גור במצב נוטה.
3. ייצב את הרגליים האחוריות או הזנב והזרועות על שולחן הפרוצדורות, כאשר הצד הגבי פונה למשתמש.
4. חותכים את העור באמצעות מס....

תוצאות

איור 1: עמוד השדרה מנותח וחוט השדרה שוחרר מעכבר יילוד בן 3 ימים. החץ ב-(a) מצביע לכיוון הקצה הקאודלי של עמוד השדרה, שם מוחדרת מחט כדי לשחרר את חוט השדרה. חוט שדרה משוחרר (b) מוצג שקוע ב-PBS.

איור 2: שיפוע צפיפו.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מצב שינה A בינוני - 500 מ"ל	תרמו-פישר	A1247501	https://www.thermofisher.com/ הזמנה/קטלוג/מוצר/A1247501
תרדמת חורף A מינוס סידן - 500 מ"ל	חתיכות מוח	ה-כא	http://www.brainbitsllc.com/ תרדמה-מינוס-סידן/
גלוטמקס 100X - 100 מ"ל	תרמו-פישר	35050061	https://www.thermofisher.com/ הזמנה/קטלוג/מוצר/35050079
תוסף B27 50X - 10 מ"ל	תרמו-פישר	17504044	https://www.thermofisher.com/ order/catalog/product/17504044
פפאין, Lyophilized - 100 מ"ג	וורטינגטון	LS003119	http://www.worthington- biochem.com/pap/cat.html
נוירובזל A בינוני - 500 מ"ל	תרמו-פישר	10888022	https://www.thermofisher.com/ הזמנה/קטלוג/מוצר/10888022
פניצילין-סטרפטומיצין (10,000 U / מ"ל)	תרמו-פישר	15140122	https://www.thermofisher.com/ הזמנה/קטלוג/מוצר/15140122
פולי-די-ליזין (PDL) הידרוברומיד- 5 מ"ג	סיגמא-אולדריץ'	P6407-5MG	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/p6407? lang=en®ion=US
למינין עכבר - 1 מ"ג	תרמו-פישר	23017015	https://www.thermofisher.com/ הזמנה/קטלוג/מוצר/23017015
טריפאן כחול - 20 מ"ל	סיגמא-אולדריץ'	T8154-20ML	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/t8154? lang=en®ion=US
OptiPrep צפיפות הדרגתית בינונית-250 מ"ל	סיגמא-אולדריץ'	D1556-250ML	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/d1556? lang=en®ion=US
Dichlorodimethylsilane (DMDCS, Sigma Silicoat)	סיגמא-אולדריץ'	440272-100 מ"ל	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/aldrich/440272? lang=en®ion=US
כלורופורם	סיגמא-אולדריץ'	288306-1L	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sial/288306? lang=en®ion=US
זכוכית פיפט - 9"	סיגמא-אולדריץ'	13-678-20ג	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/cls7095d9? lang=en®ion=US
נורת פיפטה - 5 מ"ל	סיגמא-אולדריץ'	Z186678-3EA	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/aldrich/z186678? lang=en®ion=US&cm_sp=Insite- _-prodRecCold_xviews-_- prodRecCold10-1
צלחת פטרי מותג, זכוכית - 60X15 מ"מ®	סיגמא-אולדריץ'	BR455717-10EA	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/aldrich/br455717? lang=en®ion=US
צלחת סטרילית לתרבית תאים עם 24 בארות	סיגמא-אולדריץ'	M8812-100EA	http://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/sigma/m8812? lang=en®ion=US