דיסקציה של רקמת החיך ממודל מורין בוגר: הליך כירורגי לקצירת חיך קשה וחיך רך מחלל הפה של עכבר בוגר

תקציר

מקור: Xuan Ngo, Y. et al. בידוד ותרבות של קרטינוציטים אוראליים ראשוניים מחיך העכבר הבוגר. J. Vis. Exp.(2021)

סרטון זה מדגים הליך כירורגי לניתוח רקמת החיך ממודל מורין.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. דיסקציה של רקמת החיך מעכבר בוגר

1. להקריב עכבר C57BL/6J בוגר (זכר או נקבה) על ידי פריקת צוואר הרחם בהתאם לתקנות המתקן הנוגעות לרווחת בעלי חיים.
   1. הסר את השיער סביב הפה עם מכונת גילוח. בעזרת מספריים, חותכים מהלחי לכיוון הלסת, משני הצדדים.
      הערה: העכבר צריך להיות מורדם לפני הקרבה. תערובת הרדמה של medetomidine, midazolam, ו butorphanol משמש (ראה טבלה של חומרים).
2. השתמש במלקחיים כדי לפתוח את הפה לרווחה ולספוג כל דם באמצעות צמר גפן. כדי לחטא את החיך, לנגב את החלק הפנימי של הפה עם צמר גפן המכיל 10% פובידון-יוד.
3. כדי לקצור את חיך העכבר, ראשית, השתמש בלהב אזמל כירורגי כדי לבצע חתך שולי בעובי מלא לאורך צד החיך של השיניים המקסילריות. לאחר מכן, לנתח בזהירות את החיך כולו באמצעות raspatorium.
   הערה: רספטוריום הוא כלי המשמש להרמת דש מוקופריאוסטיאלי (ראו טבלת חומרים) (איור 1B).
4. להעביר במהירות את רקמת החיך לצינור 15 מ"ל המכיל 4 מ"ל של פתרון בינוני מלא + אנטיביוטי-אנטי-מיקוטי. שמור את הרקמות על קרח עד מוכן לדגירה.
   הערה: לאיסוף מעכברים מרובים, רקמות החיך עשויות להישמר על קרח עד 4 שעות.

תוצאות

איור 1: סקירה כללית של הליך הדיסקציה והבידוד של קרטינוציטים אוראליים של עכברים. (A) ייצוג סכמטי של חלל הפה של העכבר. (B) מכשירים המשמשים לניתוח החיך ולבידוד קרטינוציטים אוראליים של עכברים. (C) תמונת שדה בהיר של חיך העכבר. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר. (D) סיכום הפרוטוקול.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מספריים של איריס	Muromachi Kikai	14090-09
מדטומידין	ניפון זניאקו קוגיו		דומיטור
מידזולאם	אסטלס פארמה		דורמיקום
No.15 אזמל חד פעמי	נוצה	219AABZX00136000
בוטורפנול	מייג'י סייקה פארמה		Vetorphale
מלקחיים מעוקלים למחצה	מרכז BRC ביו מחקר	PRI13-3376
פובידון-יוד	כיכר י'ס	872612
Raspatorium #14	כאחד	8-4599-01
מלקחיים עדינים	מרכז BRC ביו מחקר	PRI13-3374
אנטיביוטיקה-אנטי-אנטי-מיקוטית 100x	גיבקו	15240062
15 מ"ל צינור חרוטי סטרילי	בז	352096
כותנה	כאחד	63-1452-97
תוסף גדילה מוגדר EpiLife (EDGS)	גיבקו	S0120