$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. פרוטוקול EHS
- בלילה שלפני פרוטוקול EHS, הניחו את העכבר בתא הסביבתי בטמפרטורת החדר (~25°C, ≈30% לחות יחסית) כדי להתאקלם בתא.
- השתמש במערכת איסוף נתונים כדי לאסוף טמפרטורת ליבה רציפה (Tc), בממוצע על פני 30 שניות מרווחים במהלך הלילה.
- בבוקר פרוטוקול EHS, ודא שהעכבר נמצא בטווח נורמלי של טמפרטורה יומית או מתחת לו לפני העלאת טמפרטורת התא (כלומר, 36-37.5 מעלות צלזיוס). זה מבטיח שלעכבר אין חום ולא חווה לחץ מופרז בתקופה זו.
- ברגע שהעכבר יציב ובטווח של טמפרטורת ליבה רגילה במנוחה, הוציאו את המזון והמים ושקלו את החיה. סגרו את דלת התא והעלו את טמפרטורת התא ליעד של 37.5°C ו-40%-50% לחות יחסית, או הטמפרטורה והלחות הסביבתית הרצויות. בדוק את הטמפרטורה והלחות בתא באמצעות צג טמפרטורה ולחות מכוייל.
- הקיפו את החדר בווילון האפלה כדי לשמור על תאורה מינימלית והפרעות במהלך הפרוטוקול. נטר את העכבר ברציפות במהלך הפרוטוקול באמצעות מצלמות מרוחקות עם תאורת IR. מקד מצלמה שנייה בצג הטמפרטורה והלחות, הממוקם קרוב לגלגל הריצה. בצע התאמות כלשהן בבקר עבור נקודת ההגדרה של התא הסביבתי כדי להבטיח קריאות טמפרטורה מדויקות בקרבת החיה.
- לאחר שהתא הגיע לטמפרטורת היעד שלו כפי שנמדדה על ידי המצלמה השנייה על צג הטמפרטורה (זה יכול לקחת ~ 30 דקות), פתח במהירות את דלת התא והנח את העכבר בגלגל הריצה הכפוי.
- הפעל את פרוטוקול גלגל הריצה הכפוי במהירות של 2.5 מ' לדקה והגדל את המהירות 0.3 מ' לדקה כל 10 דקות עד שהעכבר מגיע ל- Tc של 41 ° C. ברגע שהעכבר הגיע לטמפרטורת ליבה זו, אפשר למהירות להישאר קבועה עד להגבלת התסמינים, המאופיינת באובדן הכרה לכאורה, נפילה לאחור או התעלפות, וחוסר יכולת להמשיך לרוץ או לאחוז בהגה. אשר נקודת זמן זו כאשר העכבר יש שלושה סיבובים לאחור על הגלגל ללא סימנים של תגובה פיזית. לחלופין, זהה נקודת קצה אנושית בהתאם לכללי IACUC המקומיים כדי לקבוע מתי להפסיק את הפרוטוקול (למשל, כאשר Tc ~ 43 ° C). נקודת קצה זו היא מעט מעל מגבלת הסימפטומים כמעט בכל העכברים.
- כדי לבצע את פרוטוקול הקירור המהיר (R), ברגע שהעכבר מגיע למגבלת התסמינים, עצור את הגלגל והסר אותו מיד מגלגל הריצה הכפוי. שקלו את העכבר והחזירו אותו לכלוב הביתי שלו כדי להתאושש בטמפרטורת החדר. במהלך תקופה זו, השאירו את דלת התא פתוחה והחזירו את נקודת האינקובטור לטמפרטורת החדר כדי לאפשר לתא להתקרר במהירות. הליך זה מביא להישרדות של >99% לטווח ארוך.