$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. הכנת עכבר
- הרדמת העכבר
- מכינים נתרן pentobarbital (50 מ"ג / ק"ג) במזרק.
- תפסו את העכבר (זכר בן 8 שבועות C57BL/6) ביד שמאל כך שבטנו פונה כלפי מעלה וראשו נמוך מזנבו. יש לחטא את עור הבטן ב-75% אלכוהול.
- מחזיקים את המזרק ביד ימין, מנקבים את הקו הלבן של הבטן עם המחט מעט לצד ימין של העור ב 3-5 מ"מ. ודא שמחט המזרק והעור נמצאים בזווית של 45 מעלות, הזריק את הפנטוברביטל באיטיות לחלל הבטן. לאחר הגילוח, יש לחטא סביב אתר החתך של העכבר 3 פעמים לסירוגין עם 75% אלכוהול ותמיסת כלורהקסידין.
- בדוק אם ההרדמה הצליחה על ידי היעדר רפלקס נכון.
- הזריקו רודאמין B איזותיוציאנט-דקסטרן לווריד הקאודלי.
- הכינו 100 מיקרוליטר של 10 מ"ג/מ"ל רודאמין B איזותיוציאנט-דקסטרן במזרק.
- נגבו את זנב העכבר ב-75% אלכוהול.
- החזק את הזנב ביד שמאל, החזק את המזרק ביד ימין עם המחט במקביל לווריד, והזריק את הצבע 100 μL.
- עצור את הדימום עם צמר גפן לאחר ההזרקה.
- השרו את פרוות הבטן של העכבר בגזה שהורטבה במים סטריליים, וגלחו את בטנו של העכבר באמצעות סכין גילוח, תוך ביצוע משיכות לכיוון הפרווה. לאחר הגילוח, יש לחטא סביב אתר החתך של העכבר 3 פעמים לסירוגין עם 75% אלכוהול ותמיסת כלורהקסידין.
- לאחר ניגוב כרית חימום עם 75% אלכוהול, פתחו את כרית החימום והניחו את העכבר על גבו בכרית החימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף שלו על 37 מעלות צלזיוס.
2. תיקון כבד העכבר עם מסגרת ההדמיה של איברי הגוף
הערה: מסגרת ההדמיה המסחרית של איברים עדיין לא שוחררה.
- הניחו יניקה נקייה במצב קבוע.
- התקינו מתקן להדמיית איברים (איור 1) ונגבו את כרית החימום ואת היניקה ב-75% אלכוהול.
- חברו את היניקה (קוטר 5 מ"מ) לצינור משאבת הוואקום והפעילו את משאבת הוואקום.
- על שולחן סטרילי מעוקר עם 75% אלכוהול, מחטא סביב אתר החתך של העכבר 3 פעמים לסירוגין עם 75% אלכוהול ותמיסת כלורהקסידין, לאחר מכן מחטא סביב אתר החתך של העכבר 3 פעמים לסירוגין עם 75% אלכוהול ותמיסת כלורהקסידין, ולאחר מכן להשתמש במספריים כירורגיים כדי לחתוך 2 ס"מ של עור מגבול החזה התחתון של העכבר ולחשוף את הכבד.
- הנח את העכבר יחד עם כרית החימום על בסיס המחזיק.
- התאימו את מתקן ההדמיה של האיברים כך שכוס היניקה תחזיק את הכבד. לאחר מכן השתמשו בלחץ שלילי של 30–35 kPa עבור יניקה, כך שהכבד מתחבר לכוס היניקה (איור 2).
3. התאמת מיקרוסקופ סריקת לייזר מולטיפוטון
- הפעל את המיקרוסקופ הרב-פוטוני ובחר את המטרה 60x/1.00 W.
- תקן את המסגרת והעכבר מתחת לעדשת המטרה.
- הוסיפו טיפה של מי מלח רגילים שיכולים לכסות את כל העדשה, שהיא מרכז היניקה, וכווננו את העדשה האובייקטיבית כך שתיגע רק במי המלח הרגילים.
- לחץ פעמיים על סמל המחשב כדי להפעיל את תוכנת הלייזר ולהפעיל את המתג. לאחר מכן לחץ לחיצה ממושכת על לחצן ההפעלה והצמצם למשך 3 שניות.
- הגדר את אורך הגל ל- 800 ננומטר.
- הפעל את תוכנת ההפעלה של המיקרוסקופ באמצעות המחשב.
- עבור הגדרת הרכישה, הגדר לייזר 800.
