שליפת עוברי עכבר טרום לידתי: הליך לקצירת עוברים מעכבר בהריון

תקציר

מקור: Yun, K. הערכת פגמים בחסימת צומת דרכי השתן על ידי הזרקת מתילן צבע כחול. J. Vis. Exp.(2017)

סרטון זה מדגים שליפת עוברים מעכבר בהריון. העוברים הפרינטליים המוחזרים יכולים לשמש כמערכות מודל לחקר התפתחות יונקים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. דיסקציה של עוברים טרום לידתיים

1. ניקוי מספריים ומלקחיים עם 70% אתנול.
2. כדי לאסוף עוברים פרינטליים ב- E18.5 או E19.5, יש להרדים עכברות הרות תחילה באמצעות שאיפת_CO2 ולאחר מכן לבצע נקע צוואר הרחם בהתאם להנחיות אתיות.
   הערה: נקבת העכבר ההרה בדרך כלל יולדת החל מ-E18.5, עם זאת, כליות גדולות יותר קלות יותר למניפולציה. לכן, כליות ב E19.5 קרוב יותר ללידה קל יותר לבצע ניתוח זה. עם זאת, גורים עם חסימות בדרכי השתן דו צדדיות מתים לאחר הלידה. בהתאם למאפיינים של עכברי ניסוי, יש לקבוע אמפירית יום/שעה מתאימים לאיסוף.
3. יש לרסס אתנול 70% על משטח הבטן הגחוני ולאחר מכן לפתוח את חלל הבטן באופן גחוני באמצעות מספריים ומלקחיים.
4. הרימו את הרחם כולו והפרידו מהגוף על ידי חיתוך במספריים מנתחים בקצות קרני הרחם.
5. שוטפים את כל הרחם עם 1x PBS בצלחת פטרי.
6. חותכים את הרחם באופן סגמנטאלי עם מספריים מנתחים ומסירים שליה עם מלקחיים מנתחים כדי לחשוף את העוברים בשקי חלמון.
7. הסר תחילה את שק החלמון ולאחר מכן הסר את קרום מי השפיר עם מלקחיים מנתחים כדי לשחרר את העוברים סביב הלידה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מספריים להפעלה עדינה	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-6702
מיקרו מלקחיים מנתחים	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-5135
פינצטה של דומונט; תבנית #5	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-5045
Quality Biological Inc. מלח רגיל - 500 מ"ל	דייגסיינטיפיק	50-983-204