בידוד שחלות עכבר יילודים: הליך כירורגי לקצירת זוג שחלות ממודל עכבר יילודים

תקציר

מקור: et al. Morgan, S. תרבות ותרבות משותפת של שחלות עכבר וזקיקי השחלות. J. Vis. Exp. (2015).

בסרטון זה אנו מתארים הליך כירורגי לבידוד שחלות מעכבר יילוד.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. דיסקציה של שחלות יילודים ותרבות

1. מניחים 1 מ"ל של מדיום דיסקציה (ממיסים 3 מ"ג/מ"ל BSA בתווך ליבוביץ L15 ומסננים דרך נקבובית 0.2 מיקרומטר, פילטר בקוטר 25 מ"מ) בכל צלחת עובר זכוכית סטרילית.
2. גורים של עכברי יילודים מזדקנים בין יום 0 ל-5 לאחר הלידה, ועוברים עריפת ראש.
3. אחזו בעור המכסה את דופן הבטן באמצעות זוג מלקחיים דקיקים ובצעו חתך גדול בעור ובדופן הגוף. פתחו את החתך כך שכל הבטן תהיה חשופה. שלפוחית השתן בדרך כלל מעורבת בשלב זה וניתן לנקב אותה כדי להקל על הדיסקציה.
4. הזיזו את המעיים מהדרך באמצעות מלקחיים של שען. עקוב אחר קרני הרחם משלפוחית השתן עד לכליה מכל צד. השחלה ממוקמת ממש מתחת לכליה בחלק העליון של הרחם ותופיע כמבנה דמוי ענן תחת מיקרוסקופ מנתח.
5. אחזו בשחלה בעדינות עם מלקחיים של שען והשתמשו במספריים כדי לנתק את החיבור שלה לרחם. מעבירים את זוג השחלות לצלחות עובריות המכילות אמצעי דיסקציה שחומם מראש.
6. לבצע דיסקציה עדינה של השחלות תחת מיקרוסקופ דיסקציה על שלב מחומם (37 מעלות צלזיוס). השתמש מחטי אינסולין כדי לחתוך את שק bursal וכל חומר עודף כולל החצוצרה, עד רק השחלה נשארת.
7. מעבירים כל שחלה לבאר של צלחת תרבית באמצעות פיפטה זכוכית מעוקלת מצוירת דק.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ליבוביץ L15	Invitrogen	11415049
αMEM	Invitrogen	22571020	מסופק כסודיום ביקרבונט חוצץ (2,200 מ"ג/ליטר)
אלבומין בסרום בקר	סיגמא אולדריץ'	A9418	למדיום דיסקציה
אלבומין בסרום בקר	סיגמא אולדריץ'	A3311	למדיום תרבות
אלבומין בסרום בקר	סיגמא אולדריץ'	A2153	לציפוי פיפטות זכוכית
FSH	מרק סרונו	גונאל פ	בדיקות אצווה נחוצות לעתים קרובות. יש להמציא תמיסת מלאי של 1IU/10μL ב-αMEM ולאחסן בטמפרטורה של -20°C
מסנני מזרקים (25 מ"מ, 0.2 מיקרומטר)	גריינר	16532ג	מסנן תאית אצטט לסינון נפחים גדולים יותר (>5 מ"ל) של בינוני.
צינורות סטריליים	גריינר	187261
צלחת 24 בארות	גריינר	662160
מחטי אינסולין	ציוד רפואי BD	037-7606	0.33 מ"מ (29 גרם) + 1 מ"ל
כלי עובר מזכוכית	VWR	720-0579	יש לעקר ולחמם לפני השימוש
פיפטות זכוכית	פישר סיינטיפיק	10209381	ציפוי BSA לפני השימוש
מחטי דיקור	Acumedic בע מ	30 מ"מ x 0.25 Type C
תמיסת פורמלין, חוצצת ניטרלית, 10%	סיגמא אולדריץ'	HT5014-120 מ"ל
קרומי נוקלאופור Whatman	קמלב	WN/110414	יש להשתמש במשטח מבריק כלפי מעלה, פוליקרבונט, קוטר 13 מ"מ, גודל נקבוביות 8.0 מיקרומטר