מידול שבץ פוטוטרומבוטי במודל עכבר: טכניקת הארה בלייזר דרך גולגולת עכבר בעקבות מתן צבע רגיש לאור כדי לגרום לפוטוטרומבוזיס

תקציר

מקור: Llovera, G. et al. Modeling Stroke in עכברים: נגעים קורטיקליים מוקדיים על ידי Photothrombosis. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים את ההליך ליצירת שבץ פוטוטרומבוטי במודל עכבר על ידי הארת לייזר של גולגולת שלמה לאחר מתן צבע רגיש לאור.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת החיה

1. יש להזריק שיכוך כאבים 30 דקות לפני הניתוח (4 מ"ג/ק"ג קרפרופן ו-0.1 מ"ג/ק"ג בופרנורפין).
2. רשום את משקל גוף העכבר כדי להתאים את המינון של רוז בנגל להזרקה (10 μL / g כלומר, 100 מיקרוגרם / גרם).
3. הניחו את העכבר בתא האינדוקציה עם קצב זרימה איזופלורני של 4% כדי להרדים אותו עד שהתנועה הספונטנית של הגוף והוויבריסה תיפסק.
4. העבירו את העכבר לתוך המסגרת הסטריאוטקטית והניחו אותו במצב נוטה עם אפו לתוך מסכת ההרדמה. לתקן את החיה ולשמור על ריכוז isoflurane על 4% במשך 1 דקה. לאחר מכן להפחית ולשמור על ריכוז isoflurane ב 2%.
5. הכנס בעדינות את הבדיקה הרקטלית כדי לפקח על הטמפרטורה לאורך כל ההליכים הכירורגיים. הגדר את כרית החימום המבוקרת משוב המשויכת כדי לשמור על טמפרטורת גוף העכבר על 37 ° C.
6. יש למרוח משחת עיניים דקספנתנול על שתי העיניים ולנקות את העור ואת הפרווה שמסביב עם חומר חיטוי.

2. מודל פוטוטרומבוזיס

1. בצע חתך אורכי 2.0-2.5 ס"מ ונסוג כדי לחשוף את הגולגולת. בצע את חשיפת הגולגולת עם חתך יחיד כדי למנוע סיבוכים בפצע.
2. הסר את periosteum בעדינות עם כותנה ולזהות את התפרים העטרה.
3. שים את משקפי המגן, הפעל את הלייזר 561 ננומטר וסמן את ברגמה +3 מ"מ שמאלה.
4. כבו את הלייזר, הדביקו מדבקה עם חור בקוטר 4 מ"מ שהונח בקואורדינטות המסומנות שהוזכרו לעיל.
5. הזריקו לעכבר ורד בנגלי (10 μL/g), תוך צפקית. מניחים את קרן הלייזר במרחק של 4-5 ס"מ מהגולגולת, מפעילים את הלייזר 561 ננומטר ומאירים את הגולגולת למשך 20 דקות.
6. יש למרוח שתי טיפות של 0.9% מלוחים על הגולגולת כדי להחזיר נוזלים, לתפור את הפצע ולהכניס את בעל החיים לתא התאוששות בטמפרטורה של 37°C כדי להתאושש מההרדמה. לאחר שעה, החזירו את העכברים לכלובים שלהם בחדר מבוקר טמפרטורה.
7. להזריק שיכוך כאבים כל 12 שעות במשך 3 ימים לאחר הניתוח (4 מ"ג / ק"ג Carprofen ו 0.1 מ"ג / ק"ג Buprenorphine).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
לייזר Wawavelenght 561 ננומטר	סולנה	קובולט HS-03
עכברי C57Bl/6J	Charles נהר	664
קולימטר	תורלאבס	F240APC-A
קוטונים	NOBA Verbondmitel Danz	974116
אתנול 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
מספריים עדינים	FST	15000-00
מלקחיים	FST	11616-15
שמיכת חימום	בקר טמפרטורה DC FHC	40-90-8ד
איזופלורן	אבוט	B506
משקפי מגן	לייזר 2000	ניר-ZS2-38
רוז בנגל	סיגמא אולדריץ'	198250-5G
תמיסת מלח	בראון	131321
מסגרת סטריאוטקטית	סטולטינג	51500U
מערכת הרדמה לאיזופלורן	דראגר
פוספט חוצץ מלוחים PH: 7.4	Apotheke Innestadt Uni München - מינכן	P32799