מודל מורין להשתלת איילט: שיטה כירורגית להחדיר איי לבלב בווריד הפורטל ומניעת דימום לאחר הניתוח

תקציר

מקור: Gou, W. et al. מזעור דימום ורידים בפורטל לאחר עירוי במהלך השתלת אי תוך כבד בעכברים. J. Vis. Exp. (2021)

בסרטון זה, אנו מתארים הליך להחדיר תאי איון הלבלב לתוך וריד פורטל הכבד, ואחריו יישום של קצף ג'ל כדי למנוע בהצלחה דימום. דימום לאחר ניתוח הוא גורם שכיח לתמותה גבוהה במהלך השתלת איון.

פרוטוקול

1. השתלת איילט

1. יש להשרות ולתחזק את העכבר בהרדמה כללית עם איזופלורן 2%. בדוק את היעדר רפלקסי הדוושה כדי להבטיח הרדמה נאותה של החיה.
2. לגלח ולהסיר את הפרווה באזור הבטן של העכבר.
3. לנהל מנה אחת לפני הניתוח של Buprenorphine (0.1 מ"ג / ק"ג i.p).
4. יש לחטא את אזור הניתוח בשלושה מגבונים לסירוגין של 2% יוד ו-75% אלכוהול.
5. בצע laparotomy עם מספריים מיקרו כדי ליצור חתך 1-1.5 ס"מ.
6. פתח את חלל הצפק עם retractor. בצע את שיטה א' או את שיטה ב' כמפורט להלן.

שיטה A: (לעצור דימום עם קצף ג'ל, איור 1A)

1. הכנת עכבר
   1. מניחים גזה סטרילית סביב החתך.
   2. בעדינות למשוך את המעי באמצעות מלקחיים ולשמור אותו על גזה.
   3. זהה את וריד הפורטל לפי מיקומו וחשוף אותו היטב.
   4. כסו את המעי בגזה חמה רטובה במי מלח במהלך כל הניתוח.
2. הכניסו את מחט מזרק האינסולין הטעונה מראש דרך וריד הפורטל ליד התריסריון (איור 1B). לשם כך, החזיקו את המחט כשהחור (שיקוע) פונה כלפי מטה ומקמו את זווית משטח הפתיחה במקביל לדופן וריד השער לפני החדירה דרך הקיר.
   1. משוך את הבוכנה כדי לשאוב קצת דם (20-50 μL) לתוך המזרק כדי לערבב את האיים הראשון.
   2. להחדיר את האיים לתוך וריד השער לאט תוך משיכה חוזרת ונשנית של הצלילה.
   3. מניחים חתיכת קצף ג'ל (בגודל 0.5 ס"מ x 0.5 ס"מ) כדי לכסות את מקום ההזרקה.
   4. לחץ על קצף הג'ל כלפי מטה עם קצה כותנה תוך שליפת המחט מווריד השער.
   5. המשך ללחוץ על הג'ל במשך כ 2 דקות כדי לוודא שאין דימום פעיל.
   6. גלגלו את קצה הכותנה מעל והרחק מקצף הג'ל כדי לוודא שקצף הג'ל מכסה היטב את וריד השער.

שיטה B: (להפסיק דימום עם כרית שומן, איור 1C)

1. חשוף את וריד הפורטל ביסודיות.
   1. השתמש בשני קצוות כותנה כדי להחזיק את וריד השער החשוף הן מצד שמאל והן מצד ימין.
   2. זהה את כרית רקמת השומן בין התריסריון לווריד הפורטלי.
   3. חדרו דרך כרית השומן לפני החדרת המחט לווריד הפורטלי (איור 1D).
   4. להחדיר את האיונים, בעקבות הליך דומה המתואר לעיל בשיטה A.
   5. משוך את המחט תוך כדי לחיצה על השומן עם קצה כותנה.
   6. המשך ללחוץ על כרית השומן במשך דקה אחת לאחר הסרת המחט.
2. לאחר אישור כי אין דימום מן הווריד הפורטל, בעדינות להחזיר את המעי לחלל הצפק במיקום המקורי שלה.
3. להשאיר 0.5 מ"ל של מלוחים חמים (36-37 ° C) בחלל הבטן לפני הסגירה.
   הערה: מי מלח חמים מקלים על תנועת המעי לאחר הניתוח והחלמתו ומונעים נמק במעי.
4. סגור את שכבת השריר עם תפר 5-0.
5. סוגרים את שכבת העור בתפר 4-0.
6. הניחו את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום עד להחלמה מלאה מההרדמה.
7. המשך לספק משכך כאבים (למשל, buprenorphine 0.1 מ"ג / ק"ג i.p.) כל 12 שעות וחום משלים במשך 48 שעות לאחר הניתוח.
   הערה: הליך השתלת האיון אורך כ-15-20 דקות.

תוצאות

איור 1: איור של הליכי השתלת איון תוך כבדי.(א, ג). סכמות של שלבי מפתח המשמשים בשיטה A ובשיטה B. (B, D). איים הוזרקו ישירות דרך וריד הפורטל (C) או בעקיפין דרך פט שומן (D).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
10% פורמלין חוצץ נייטרלי v/v	פישר סיינטיפיק	23426796
1 מ"ל מזרק עם מחט	AHS	AH01T
20 מ"ל מזרק	ב.ד.	301031
מחטים היפודרמיות בגודל 25 גרם x 5/8 אינץ'	ב.ד.	305122
תחבושות להכנת אלכוהול, סטריליות	פישר סיינטיפיק	22-363-750
מערכת הרדמה לבעלי חיים	VetEquip, Inc.	בע"מ 901806
Buprenorphine hydrochloride, הזרקה	Par מוצרים סטריליים LLC	NDC 42023-179-05
אתנול מוחלט (200 הוכחה), כיתה ביולוגיה מולקולרית	פישר סיינטיפיק	BP2818500
דק במיוחד מיקרו חיתוך מספריים 4" ישר חד	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-5882
Gelfoam (ספוג ג'לטין נספג USP)	חברת Pharmacia & Upjohn	34201
מלקחיים Graefe 4" קצה עדין במיוחד	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-5136
פד מחומם	אמזון	B07HMKMBKM
הגר-באומגרטנר מחזיק מחטים 5.25"	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-7850
מזרק אינסולין עם מחט 27 מד	ב.ד.	879588
רפידות להכנת יוד	פישר סיינטיפיק	19-027048
איזופלורן	טיפול נמרץ פיראמלי	NDC 66794-017-25
תפר פוליפרופילן 4-0	Med-Vet הבינלאומי	MV-8683
תפר פוליפרופילן 5-0	Med-Vet הבינלאומי	MV-8661
נתרן כלורי, 0.9% תמיסה תוך ורידית	VWR	2B1322Q
דראפה כירורגית, סטרילית	Med-Vet הבינלאומי	DR1826