כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. ניתוח הצומת הסינואפרוזדורי (SAN)
- הכינו את הפתרון של Complete Tyrode לדיסקציה של SAN.
- הוסף 400 μL של הפרין (1,000 USP / מ"ל) ל 40 מ"ל של תמיסה של Complete Tyrode וחם באמבט מים 37 ° C.
- הזריקו לעכבר תוך צפק 200-300 מיקרוליטר הפרין (1000 USP/מ"ל) ואפשרו לחיה לשבת במשך 10 דקות.
- הרדימו את העכבר heparinized על ידי מנת יתר isoflurane.
- הניחו את העכבר בתא זכוכית קטן המכיל אדי איזופלורן הנוצרים על ידי הוספת 200-300 מיקרוליטר של איזופלורן נוזלי לנייר סינון בתוך צינור פלסטיק מחורר.
הערה: מכיוון שאיזופלורן עלול לגרום לגירוי בעור ויכול להיספג גם דרך העור, הנוזל לא אמור לבוא במגע ישיר עם העכבר. לכן, המגבון הספוג באיזופלורן מונח בצינור מחורר למשה.
- ודא מוות על ידי הפסקת התנועה ומאמץ הנשימה ועל ידי היעדר רפלקס צביטת בוהן. המוות אורך בדרך כלל כ-1-2 דקות לאחר הכניסה לחדר.
הערה: המוות מלווה בדרך כלל במתן שתן.
- הניחו את העכבר במצב שכיבה על לוח דיסקציה עם כפות מושטות וקיבעו את הכפות ללוח באמצעות מחטי מזרק באורך 1 אינץ', 23 מד. לאחר מכן הסר את הפרווה בקרבת החלק התחתון של כלוב הצלעות באמצעות מספריים כירורגיים וחיתוך הפרווה בשורשים.
הערה: עבור לוח דיסקציה, ניתן להשתמש במכסי קירור פוליסטירן.
- בזמן שאתם מחזיקים את העור עם המוסטט, השתמשו במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך רוחבי בעור ממש מתחת לתחתית כלוב הצלעות בערך מהקשת הקוסטלית השמאלית לקשת הקוסטלית הימנית (איור 1A).
- פתחו את הצפק בעזרת מספריים כירורגיים והפרידו בזהירות את הכבד מהסרעפת, תוך זהירות שלא לנקב את הכבד, מה שיגרום לדימום יתר (איור 1B). חתכו את הסרעפת לאורך בית החזה כדי לחשוף את חלל בית החזה (איור 1C-D).
- בעזרת מספריים כירורגיים, חתכו את הדפנות הרוחביות של כלוב הצלעות משולי הקשתות הקוסטליות עד עצם הבריח כדי לחשוף את הלב, תוך זהירות להימנע מפגיעה בלב (איור 1D). לאחר מכן השתמש במחט מזרק של 23 מד כדי להצמיד את כלוב הצלעות מעל הכתף, להחזיק אותו במקומו והרחק מדרכו של שדה הניתוח.
- השתמש פיפטה העברה לטפטף חם (37 ° C) heparinized להשלים את הפתרון של Tyrode על הלב כדי לשמור אותו לח.
הערה: אל תתנו ללב להתייבש.
- הסירו את הריאות על-ידי החזקתן במלקחיים דקיקות במיוחד וקטיעת קנה הנשימה באמצעות מספריים כירורגיים (איור 1E).
- החזיקו את קודקוד הלב עם מלקחיים Graefe עדינים במיוחד והסירו אותו על ידי חיתוך אבי העורקים והוורידים עם מספריים כירורגיים. העבירו את הלב לצלוחית פטרי המכילה אלסטומר סיליקון נרפא (איור 2A) והשתמשו בפיפטת העברה כדי לרחוץ את הלב עם 2-3 מ"ל של חום (37°C) הפריניזציה מלאה של תמיסת Tyrode.
הערה: יש להיזהר שלא לפגוע בדופן האחורית העדינה של האטריה הימנית, המכילה את ה-SAN, ובוורידי הפרוזדורים הימניים המחוברים. רחצת הלב בתמיסה של Complete Tyrode מונעת מהלב להתייבש אך אינה שוקעת את הלב בתמיסה באופן מלא מכיוון שהיא תפגע בראות במהלך הנתיחה.
- כיוון הלב עם האטריום הימני מימין לנסיין והאטריום השמאלי משמאלו של הנסיין.
הערה: דיסקציה של רקמת SAN צריכה להיעשות במהירות על מנת למנוע פגיעה הקשורה לאיסכמיה.
- מחברים את קודקוד הלב לצלחת בעזרת סיכת דיסקציה. לאחר מכן, בעודכם מחזיקים את הווריד קאווה התחתון עם מלקחיים למינקטומיה Dumont #2, הכניסו מחט מזרק 22G דרך הווריד קאווה התחתון והעליון כדי לאתר את מיקומם באטריום הימני, אשר מזהה גם את המיקום המשוער של ה-SAN (הממוקם בחלקת הרקמה בין הווריד קאווה התחתון והעליון (איור 2B).
- בעזרת סיכות דיסקציה קטנות, הצמד את נספחי הפרוזדורים השמאלי והימני לצלחת.
- בעת החזקת התוספתן פרוזדורי השמאלי עם מלקחיים למינקטומיה Dumont #2, לשים סיכת דיסקציה דרך נספח פרוזדורים שמאל להחזיק אותו במקום.
- בעת החזקת תוספתן פרוזדורים ימין עם מלקחיים Dumont #55, לשים סיכת דיסקציה דרך נספח פרוזדורים ימין להחזיק אותו במקום.
הערה: ניתן להשתמש באותו סוג של מלקחיים כדי להחזיק את נספחי הפרוזדורים השמאלי והימני במידת הצורך.
- הסר את מחט המזרק המשתרעת על הוורידים
.
- כדי לשחרר דם מהלב, השתמשו במספריים של Castroviejo כדי להסיר את קודקוד הלב (כלומר, את החצי התחתון) על-ידי ביצוע חתך רוחבי על פני החדרים (איור 2C). לאחר מכן, לשטוף את הלב על ידי הוספת חם (37 ° C) heparinized להשלים את הפתרון של Tyrode עם פיפטה העברה.
- השתמש מספריים Castroviejo לחתוך לאורך המחיצה אטריובנטריקולרית שמירה על החתך קרוב יותר לחדר מאשר אטריה. ממשיכים לחתוך לאורך המחיצה האטריובנטריקולרית עד להפרדת האטריה מהחדרים.
- חותכים לאורך המחיצה הבין-פרוזדורית כדי להסיר את האטריום השמאלי.
- הניחו פיני דיסקציה בשולי האטריום הימני כדי לגרום לו להיות שטוח (איור 2D). הסר את כל השומן, כלי הדם או הרקמה שנותרו מהאטריום באמצעות מספריים Castroviejo.
- מקמו את ה-SAN באטריום הימני, אשר בכיוון זה גובל בקירוב על-ידי הווריד הנבוב העליון (למעלה), הווריד הנבוב התחתון (למטה) וה-cristae terminalis (משמאל) (איור 2D).
הערה: מסוף הקריסטה מופיע כרכס שרירי כהה בין התוספתן הפרוזדורי הימני לבין ה-SAN. לעתים קרובות ניתן לראות גם את עורק ה-SAN זורם דרך ה-SAN (איור 2D).
