קציר שחלות שלם מעכבר: הליך כירורגי לבידוד שחלה מלאה ממודל מורין

תקציר

מקור: Mason, J. B. et al. Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice. J. Vis. Exp. (2018)

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי לקצירת שחלה שלמה ממודל עכבר.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. השתלת שחלות שלמות בעכברות זקנות

הערה: פרוטוקול זה מתאר את ההליך המשמש במהלך העברת השחלות מעכבר צעיר (גיל 60 יום) לנקבה לאחר הרבייה (גיל 12 חודשים) מאותו זן גזעי. אותו הליך משמש להשתלת שחלות בין כל שתי נקבות עכברות.

1. לשקול ולהרדים את בעל החיים התורם על ידי הזרקה intraperitoneal (I.P., 27 ga מחט), למשל באמצעות קוקטייל של קטמין, xylazine ו acepromazine (65 מ"ג / ק"ג קטמין, 13 מ"ג / ק"ג xylazine 2.0 מ"ג / ק"ג, acepromazine; מנת קוקטייל - 6.5 מ"ל / ק"ג). יש להחזיר את בעל החיים לכלוב הביתי המחומם עד לכניסת ההרדמה לתוקף.
2. לאחר ההרדמה, הוציאו את בעל החיים מהכלוב הביתי והניחו על מגבות נייר מחוממות. באמצעות קוצץ (#40 להב מועדף), להסיר את השיער כמה מ"מ לרוחב לקו אמצע מכל צד, מתחיל ממש מתחת לצלעות ונע דיסטלית, הכנת 'טלאי' גזוז על 2-3 ס"מ מרובע משני הצדדים של העכבר נוטה משאיר רצועת שיער בערך 1-2 ס"מ מכסה את קו האמצע.
3. נגבו קלות את האזורים החתוכים עם 70% אתנול ומרחו תמיסת בטאדין על האתר החתוך עם צמר גפן.
4. יש למרוח ג'ל אנטיביוטי להגנה על העיניים ולתת מלוקסיקאם (2.0 מ"ג/ק"ג) תת עורית (S.C., 27 ga needle) על האספקט הצידי של צוואר החיה להקלה על כאבים לאחר הניתוח.
5. הניחו את בעל החיים במצב נוטה על שדה כירורגי סטרילי מחומם ונגבו את האזור החתוך בגזה כותנה 70% ספוגה אתנול בגודל 2X2 ס"מ על 2 ס"מ.
6. בצעו חתך פארא-מותני בקוטר 1.0-1.5 ס"מ ונתחו בבוטות את העור מהפאשיה שמתחתיו. בצע חתך נוסף דרך הפאשיה. יש לנתח באופן בוטה לרוחב מתחת לפשיה זו באופן שטחי ככל האפשר עד להגעה לחלל הבטן
7. מניחים וילון כירורגי קטן מעל החתך (חותכים מגזה בגודל 2X2 ס"מ) ומרטיב את הווילון במי מלח סטריליים.
8. בעזרת מלקחיים קטנים, מאתרים את רקמת השומן המקיפה את השחלה בחלל הבטן ומחלצים בעדינות את כרית השומן והשחלה ומניחים אותה על שארית הגזה הרטובה. כרית שומן השחלות תיראה "לבנה" יותר מרקמת השומן שמסביב.
9. הניחו מהדק בולדוג בקוטר 1.5 אינץ' על כרית השומן (תוך הקפדה שלא לחסום את הבורסה השחלתית) כדי להחזיק את מערכת העיכול במקומה במהלך ההליך.
10. הזיזו את המיקרוסקופ המנתח למקומו וזהו בבירור את הבורסה השחלתית. אחזו את הבורסה עם שני מלקחיים שענים וחתכו את הבורסה השחלתית מול הילום השחלה כדי לחשוף את השחלה. אם אזור הגישה המיועד של הבורסה הוא כלי דם מאוד, יש למרוח טיפת אפינפרין (1:100,000) עם מזרק על משטח הבורסה כדי להפחית את הדימום בזמן הקריעה.
11. הסר בעדינות את השחלה מהבורסה השחלתית והבלו את השחלה על ידי הידוק בהילום השחלה עם מלקחיים שען למניעת דימום.
12. הניחו את השחלה התורמת בזכוכית שעון מלאה במי מלח סטריליים בטמפרטורה של 4°C, כסו באופן רופף והניחו בצד עד להכנה להשתלה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקרוסקופ מנתח	כל טווח ניתוח עם מרחק עבודה מתכוונן.
סירקולטור מים חמים ופד מתאים לשדה הניתוח/התאוששות בגודל שלך.	סטרייקר/גיימאר	TP700	רפידות מים במחזור מייצרות שדות הפעלה והתאוששות אחידים ועקביים בטמפרטורה.
כלי ניתוח-מכשירי דיסקציה לגישה למערכת הרבייה			הבחירה בכלי ניתוח ספציפיים היא מאוד ספציפית למנתח
חומר תפר לבורסה שחלתית	תפרים אלקטרוניים	2809 גרם: 9-0 או 2810 גרם: 10-0 ETHILON שחור 5" BV130-5 Taper	תפר 10-0 יכול להיות קשה לאתר אם נופל על שדה הניתוח.
ספוג ג'לטין נספג	פייזר	גלפואם- פייזר 09-0315-08	חותכים לחתיכות קטנות (~ 2 מ"מ) בתנאים סטריליים.
סיכות לסגירת העור	בקטון דיקינסון	MikRon Autoclip 9 מ"מ (BD 427631)
משחת עיניים.	MWI אספקה וטרינרית ושות'		משחה אופתלמית סטרילית Puralube
מזרקים להרדמה, שיכוך כאבים ואפינפרין	MWI אספקה וטרינרית ושות	BD 305536	27g x 3/8in, שיקוע תוך עורי 1/2 מ"ל
מזרקים לתמיסת מלח.	MWI אספקה וטרינרית ושות	BD 309657.	מזרק 3 מ"ל, קצה luer-lok, 27 גרם מחט
קליפרס/להב	אנונימי	קוצץ להבים נשלף אלחוטי Super AGR+ ™ ולהב CeramicEdge® #40.	כל קוצץ עם להב דק.
אתנול	אספקת כימיקלים אוניברסיטאית		יש לדלל עד 70% לשימוש.
תמיסת בטאדין	MWI אספקה וטרינרית ושות'	3233
רפידות גזה 2x2	MWI אספקה וטרינרית ושות'	3073	אוטוקלאבד עם חבילות ניתוח
חרוזי זכוכית בורוסיליקט	Sigma-Aldrich ושות	Z273619	אוטוקלאבה בבקבוקוני סינטיל
4-ויניל ציקלוהקסן דיפוקסיד	סיגמא-אולדריץ' ושות'	94956

' ' '