מאמר שיטה

הזרקה תוך ורידית מבוססת צנתר של חומרים ניסיוניים: טכניקה להעברת חומרים ניסיוניים תוך ורידי דרך וריד הצוואר במודל עכבר

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Bornert, A. et al. in vivo הדמיה של שני פוטונים של מגה-קריוציטים ופרוסטלטים במוח עצם הגולגולת של עכבר. J. Vis. Exp. (2021)

בסרטון זה אנו מתארים שיטה להשתלת קטטר בווריד הצוואר של מודל עכברי שדרכו ניתן להעביר חומרים ניסיוניים כגון תרופות וצבעי נותב דרך הווריד in vivo. סידור כזה, כאשר הוא מחובר למערכות אחרות, יכול לשמש גם לניטור המודינמיקה ודגימת דם.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת עכברים והחדרת קטטר לווריד הצוואר

הערה: כאן, זכר או נקבה, עכברי כתב mTmG בני 5-7 שבועות (B6.129(Cg) Gt(ROSA)26Sortm4(ACTBtdTomato,-EGFP)Luo10) שחצו עם עכברי Pf4-cre, מה שאיפשר תיוג פלואורסצנטי ירוק עז במגה-קריוציטים וטסיות דם. לפני תחילת הניסוי, לחמם מראש את תא החימום של המיקרוסקופ במשך כמה שעות.

  1. העבירו את העכבר לחדר ההדמיה והמשיכו להרדמה.
    1. להרדים את העכבר על ידי הזרקה intraperitoneal (i.p.) של תמיסה של קטמין (קטמין (100 מיקרוגרם / גרם) וקסילזין (10 מיקרוגרם / גרם) (5 μL / גרם).
      הערה: מתן חוזר ונשנה של קטמין/קסילזין משמש כאן ועובד היטב אך דורש הפסקה של ההקלטה להזרקה חוזרת רגילה. לחילופין, אם קיים מכשיר הרדמה, ניתן לבצע את השראת ההרדמה עם קטמין/קסילזין ולאחר מכן לשמור אותה תחת שאיפת גזים (תערובת של איזופלורן, אוויר וחמצן).
    2. החליפו את בעל החיים בכלוב שלו עד שיגיע להרדמה עמוקה. מניחים את העכבר על צלחת מחוממת מחוממת ב 37 ° C עבור כל מניפולציות הבאות.
      הערה: בזמן שבעל החיים מגיע להרדמה עמוקה, הפעילו את המיקרוסקופ ואת כל הציוד והגדירו את הפרמטרים השונים הדרושים כדי להתחיל את הניסוי לאחר סיום הניתוח. כאן, ההליך נמשך רק 3 שעות והוא סופני. העכבר מורדם לאחר הניסוי מבלי להתעורר. לפיכך, חיטוי אתנול לעור ומכשירים מספיק. עם זאת, בהתאם להנחיות המוסדיות, או אם ההליך יימשך זמן רב יותר, יש להשתמש בשיטות חיטוי מלאות יותר כגון שלושה פילינג לסירוגין עם בטאדין/פובידון ואלכוהול.

2. התקן קטטר בווריד הצוואר.

הערה: חשוב להימנע ככל האפשר מזיהום מיקרוביאלי במהלך הניתוח. הקפד לחטא בזהירות את העור עם אתנול 70% (EtOH) לפני שתמשיך בניתוח. השתמשו תמיד במספריים ובפינצטה מעוקרים, ושטפו אותם באופן קבוע ב-70% EtOH. לעבוד במקום נקי וללבוש מסכת פנים. צנתר "מעל המחט" 22 גרם, המורכב ממחט בתוך צינור פלסטיק, משמש להזרקה תוך ורידית (ראה טבלת חומרים).

  1. הניחו את העכבר על גבו וקיבעו את הרגליים הקדמיות בעזרת סרט ניתוח כדי למתוח את הגרון (איור 1A). לחטא את הגרון עם 70% אתנול.
    הערה: לנוחיותכם, ניתן לגלח את הגרון לפני הניתוח. אם ההליך נמשך זמן רב יותר, יש לבצע גילוח זהיר לטכניקה אספטית נכונה.
  2. בצע חתך של 0.7-1 ס"מ מעל וריד הצוואר הימני או השמאלי באמצעות מספריים סטריליים. מתחו את רקמת החיבור הסמוכה כדי לחשוף את הווריד הצווארי החיצוני ואת החלק העליון של שריר החזה (איור 1A).
  3. מלאו את הצנתר במי מלח פיזיולוגיים חמים וסטריליים. הכניסו את הצנתר לווריד לאחר חדירה דרך שריר החזה (איור 1B).
    הערה: יש להקפיד להימנע מבועות אוויר בתוך הצנתר. חשוב להחדיר את הצנתר דרך השריר כדי למנוע דימום שכן השריר יהווה נקודת דחיסה. אפילו עכברים עם פגמים בהמוסטזיס, כגון עכברי Itgb3-/, אינם מדממים עם החדרת קטטר בגישה זו.
  4. הסר בעדינות את המחט, ואם יש צורך, בזהירות להעביר את הצנתר עמוק יותר לתוך הווריד. חברו את המזרק וייצבו את הצנתר על ידי הוספת טיפת דבק כירורגי (Table of Materials).
    הערה: ניתן להכניס קטטר לתוך וריד הזנב, אם כי זה דורש קצת תרגול כי הווריד יש קליבר קטן יותר. זה קשה במיוחד בעת שימוש בעכברים עם שיער כהה, שווריד הזנב שלהם כמעט ולא נראה. בשל איכותו הגדולה יותר, מיקום הצנתר בתוך הווריד הצווארי עשוי לאפשר הזרקה אמינה יותר של נפחים גדולים יותר או טיפולים חוזרים. שימו לב שהמזרק מלא בפעם הראשונה במי מלח חמים, ואל תשכחו להזריק את הנפח המת לפני הזרקת תמיסת התרופה.
  5. החזירו בזהירות את העכבר למצב נוטה (איור 1C). יש למרוח ג'ל (טבלת חומרים) על העיניים למניעת יובש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: החדרת הצנתר. (A) נעשה חתך כדי לחשוף את הווריד הצווארי ואת החלק העליון של שריר החזה. (B) הצנתר המלא במי מלח מוחדר לווריד הצוואר על-ידי מעבר דרך השריר, ויוצר נקודת דחיסה. (C) מסובבים בזהירות את העכבר כך שהוא מונח משטח הגחון כלפי מטה כשהקטטר ממוקם היטב.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
היסטואקריל 5 x 0, 5 מ"ל בראון 1050052פתרון הזרקה של דבק כירורגי
אימלג'ין/קטמין 1000 fl/10 מ"ל בורינג 3661103003199.00הגנה על העיניים
רומפון קסילזין 2% fl/25 מ"ל באייר 4007221032311.00
צנתר Surflo IV - כחול 22 גרם תרומו SR-OX2225C1

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים