התקנת חלון הדמיה תוך-חיוני של הלבלב במודל עכבר: חלון הדמיה משולב של הלבלב לקיטוע זמן ב-Vivo Imaging של מיקרו-מבנה לבלב מורין

תקציר

מקור: Park, I. et. al. Stabilized Longitudinal in vivo הדמיה ברמה התאית של הלבלב במודל מורין עם חלון הדמיה תוך חיונית של הלבלב. J. Vis. Exp. (2021)

סרטון זה מדגים את ההליך להשתלת חלון הדמיה של הלבלב כדי להפריד את הלבלב מהמעיים לצורך הדמיה אורכית ברזולוציה גבוהה של מיקרו-מבנה הלבלב.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. כירורגיה

1. הכינו משטח כירורגי סטרילי ועיקרו את המשטחים עם 70% אתנול.
   הערה: עבור מפגשי הדמיה אורכיים, טכניקה אספטית היא חיונית.
2. מרדימים עכברים עם תערובת של tiletamine/zolazepam (30 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (10 מ"ג/ק"ג).
   הערה: שימוש בטילטמין/זולאזפם מומלץ במקום קטמין בגלל ההשפעה השלילית של היפרגליקמיה. יש לבחור הרדמה אופטימלית לצורך הניסוי.
3. עקוב אחר טמפרטורת הגוף באמצעות בדיקה רקטלית עם כרית חימום מבוקרת הומיאותרמית.
4. יש לגלח את האגף השמאלי של העכבר ולמרוח שלושה סבבים של פילינג מבוסס אלכוהול ויוד לסירוגין.
   הערה: אם קרם depilatory משמש, לא להשאיר יותר מ 1 דקה כדי למנוע כוויה כימית.
5. בצע חתך של 1.5 ס"מ באגף השמאלי של העכבר ונתח את העור והשריר.
6. ביצוע תפר מיתר ארנק עם תפר שחור או ניילון 4-0 בשולי החתך.
7. השתמש micro retractor על החתך בעדינות לחשוף את הטחול.
8. בזהירות לארוז את הטחול עם מלקחיים טבעת ולזהות את הלבלב.
9. מקם את החלון בצלע העכבר והעבר את הטחול והלבלב דרך החלל הפתוח של החלון. מניפולציה של הלבלב צריך להיות עדין מאוד כפי שהוא יכול לגרום לדימום או הלבלב.
   הערה: תכנון מותאם אישית של חלון הדמיה תוך-חיוני של הלבלב כדי לבודד את הלבלב מהמעי בחלל הבטן (איור 1A, B).
10. מניחים בעדינות את הלבלב על הצלחת של חלון ההדמיה; הטחול יונח על החלל הפתוח של החלון.
11. יש למרוח טיפות של דבק N-butyl cyanoacrylate בשולי חלון ההדמיה.
    1. כדי למזער את כמות הדבק המוחל, השתמש במחט קטטר 31 G עבור היישום. אם כמות הטיפה גדולה, הרקמה תיצמד שלא במתכוון לחלון או לזכוכית הכיסוי.
12. יש למרוח בעדינות זכוכית כיסוי עגולה בקוטר 12 מ"מ על שולי חלון ההדמיה.
13. משוך את לולאת התפר כך שתתאים לחריץ הרוחבי של החלון וקשור אותה שלוש פעמים.
14. חתכו את האתר הפרוקסימלי המקסימלי של הקשר כדי למנוע הפרעה של תפרים הדוקים כאשר עכברים אלה ערים.
15. תנו לעכברים להתאושש מהרדמה (2-3 שעות) ולהזריק קטופרופן (5 מ"ג/ק"ג, תת עורי בעור הרפוי בבסיס הצוואר או הירך של החיה) לשיכוך כאבים. הערכה מחדש עבור סימנים של כאב כל 12 שעות ketoprofen יש לשקול כל 24 שעות במשך 1-3 ימים.
    הערה: שיכוך כאבים משפיע על הפרשת אינסולין בתגובה לגלוקוז. הבחירה והעיתוי של שיכוך כאבים חייבים להיות אינדיבידואליים לצורך הניסוי.
16. התאימו את העכבר לכלוב עם מצעים מספיקים כדי למנוע מגע של החלון לכלוב. הימנעו משיכון הבית עם העכברים ללא ניתוח חלון.

תוצאות

איור 1. עיצוב וצילום חלון ההדמיה התוך-חיונית של הלבלב. (A) מבט תלת-ממדי וחתך רוחב של חלון ההדמיה התוך-חיונית של הלבלב. (B) צילום קדמי ואחורי של חלון ההדמיה של הלבלב.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
כיסוי משקפיים עגול	מרינפלד	111520	זכוכית כיסוי לחלון הדמיה של הלבלב
מספריים של איריס	JEUNGDO ביו & צמח ושות', בע מ	S-1107-10	ניתן להחליף מוצר זה במוצר של חברה אחרת
לוקטיט 401	הנקל	401	דבק N-בוטיל ציאנואקרילט
מחזיק מחט מיקרו	JEUNGDO ביו & צמח ושות', בע מ	H-1126-10	ניתן להחליף מוצר זה במוצר של חברה אחרת
מיקרו רקטרקטור	JEUNGDO ביו & צמח ושות', בע מ	17004-03	ניתן להחליף מוצר זה במוצר של חברה אחרת
מיקרו-מלקחיים	JEUNGDO ביו & צמח ושות', בע מ	F-1034	ניתן להחליף מוצר זה במוצר של חברה אחרת
ניילון 4-0	איילי	NB434	תפר לא נספג
Omnican N 100 30G	בי בראון	FT9172220S	עבור צנתר כלי דם, יש להשתמש רק בחלק המחט
חלון הדמיה של הלבלב	הנדסת גאומטו	הזמנה מותאמת אישית	חלון הדמיית לבלב - הזמנה מותאמת אישית
פיזיוסוויט	קנט סיינטיפיק	PS-02	בקר טמפרטורה הומאותרמי
טבעת מלקחיים	JEUNGDO ביו & צמח ושות', בע מ	F-1090-3	ניתן להחליף מוצר זה במוצר של חברה אחרת
רומפון	באייר	רומפון	חומר הרדמה
זולטיל	וירבאק	זולטיל 100	חומר הרדמה
BALB/C עירום	אוריינטביו	BALB/C עירום	BALB/C עירום