כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. זילוח מקדים של לב העכבר
הערה: פיפטת העברת הפלסטיק המשמשת למציצת הלב צריכה להיות רכה ולא להיות מחודדת בחדות לכיוון הקצה. בחר מהדק כלי דם קטן עם serration. המכשירים המומלצים מפורטים בטבלת החומרים.
- כריתה של לב העכבר והידוק אבי העורקים
הערה: יש להרדים את העכברים הבוגרים (בני >8 שבועות) על ידי מנת יתר של נתרן פנטוברביטל (>300 מ"ג/ק"ג, הזרקה תוך-צפקית [i.p.]) עם הפרין (8000 יחידה/ק"ג).
- הבלו את לב העכבר במהירות על ידי מציצה.
- פתח את חלל בית החזה במהירות כדי לחשוף את הלב. חותכים את פיפטת העברת הפלסטיק, שקצהו זהה בגודלו, או מעט קטן ממנו, ללב החשוף (בדרך כלל באתר כ -1 ס"מ מהסימן 0.5 מ"ל לכיוון הקצה, אך זה תלוי בגודל הלב).
- מוצצים את הלב לתוך הפיפטה, מרימים את הפיפטה כדי ליצור מספיק מקום להכניס מספריים, ומוציאים את הלב עם מספריים מעוקלים מהצד הגבי, כדי להימנע מפגיעה באטריה.
- העבירו מיד את הלב שנכרת לכוס זכוכית בנפח 30 מ"ל המכילה CIB-EGTA מקורר כקרח כדי לעצור את ההתכווצות. הליך זה אורך בדרך כלל <1 דקות.
- ניקוי סביב אבי העורקים
- מעבירים את הלב לצלחת תרבית בקוטר 35 מ"מ מלאה ב-CIB-EGTA מקורר כקרח ומסירים את הריאה ורקמות גלויות אחרות, ואז מעבירים את הלב הנקי גס למעמד הלב המלא ב-CIB-EGTA צונן ומניחים אותו עם הקודקוד כלפי מטה.
- תחת המיקרוסקופ הסטריאוסקופי, הסר את השומן ואת רקמות החיבור כדי לנקות סביב אבי העורקים. אם אורכו של אבי העורקים החתוך ארוך מדי כולל העורק הברכיוצפלי, עורק התרדמה המשותף השמאלי, או העורק התת-קלאבי השמאלי, חתכו את אבי העורקים ממש מתחת לעורק הברכיוצפלי כדי לקצר אותו על מנת להמשיך לשלב הבא. הליך זה אורך בדרך כלל כ -4 דקות
- הידוק אבי העורקים והנחת הלב המהודק על צלחת הזילוח
- הכנס את מחט ההזרקה והתחל זילוח כדי לשחרר דם
- מתחת למיקרוסקופ, הניחו את הלב בדוכן הלב. המפעיל צריך לפנות למשטח הקדמי של הלב, להרים את קצה אבי העורקים עם פינצטה, ולהדק את אבי העורקים ליד האטריה עם מהדק כלי דם קטן תוך דחיפה עדינה על אבי העורקים
קצת.
- הניחו את הלב המהודק על צלחת הזילוח כשהצד הקדמי כלפי מעלה, ולאחר מכן כסו אותו בכמה טיפות של CIB-EGTA כדי למנוע ממנו להתייבש. הליך זה אורך בדרך כלל <20 שניות.
- זילוח מקדים של הלב
הערה: ראשית, לחורר את הלב עם CIB-EGTA כדי לפלוט דם ולמנוע קרישה.
- הכנס את מחט ההזרקה והתחל זילוח כדי לשחרר דם
- הגדר את מזרק 20 מ"ל מלא CIB-EGTA שחומם מראש מחובר לצינור הארכה גמיש ומחט הזרקה מסומנת על משאבת העירוי. הפעל את המשאבה בקצב איטי של 0.5 מ"ל/דקה כדי למלא בזהירות את המחט והצינורית ב- CIB-EGTA ולהקפיד למנוע כניסת אוויר לצינור.
- מניחים את מחט ההזרקה על צלחת הזילוח עם הצד הקצר יותר של הצורה האלכסונית מלפנים. החלק את המחט לכיוון קודקוד הלב עד שהיא נוגעת בו, ולאחר מכן הכנס בזהירות את המחט ליד קודקוד החדר השמאלי לחדר החדר מבלי לסובב. אין לנתק את המחט מהצלחת בעת ביצוע ההחדרה.
- צפו בסימן האדום כדי להעריך את עומק החדרת המחט. כאשר החדרת המחט הושלמה, הדם הזורם מן העורק הכלילי צריך להתחיל להשתחרר.
- תקן את מחט ההזרקה על הצלחת עם נייר דבק, והגדל את מהירות המשאבה ל 1 מ"ל / דקה. הליך זה אורך בדרך כלל כ -30 שניות. אם הלב מחורר בהצלחה, ניתן לראות את זרימת CIB-EGTA בנימים ממש מתחת לאפיקרדיום מתחת למיקרוסקופ.
