עכבר ניתוח נפח בלוטות הלימפה המפשעות: טכניקת הדמיה אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד כדי לקבוע את נפח בלוטת הלימפה המפשעתית במודל העכבר

תקציר

מקור: Vitiello, M. et. al., ניתוח נפח בלוטות הלימפה על ידי הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד במודל העכבר המהונדס גנטית Braf/Pten של מלנומה. J. Vis. Exp. (2021)

בסרטון זה, אנו מדגימים את הטכניקה לדמיין את בלוטת הלימפה המפשעתית במודל עכבר באמצעות הדמיית אולטרסאונד בתדר אולטרה גבוה. טכניקת הדמיה לא פולשנית זו מאפשרת מעקב אחר השינוי בנפח בלוטות הלימפה בחיה לאורך זמן.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הליך הדמיה

1. הכניסו את העכבר לתא אינדוקציה להרדמת גזים וספקו 3% איזופלורן בחמצן טהור עד שבעל החיים מורדם לחלוטין. ודא את עומק ההרדמה על ידי חוסר תגובה לצביטת כפות.
2. העבירו את בעל החיים לקרש מחומם - חלק מכונן של תחנת ההדמיה UHFUS - המחזיקים את בעל החיים במצב שכיבה. השתמש בדיקה רקטלית משומן עם וזלין כדי למדוד את טמפרטורת הגוף. כוונן את טמפרטורת הלוח כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של העכבר בטווח הפיזיולוגי (36 ± 1°C).
3. יש להרטיב את עיני העכבר עם משחה וטרינרית למניעת יובש במהלך ההרדמה. לספק גז נרקוטי (1.5% איזופלורן בחמצן טהור) דרך מסכת אף של עכבר. התאם את אחוז האיזופלורן כדי לשמור על עומק ההרדמה הנכון.
4. מצפים את הכפות הקדמיות והאחוריות במשחה מוליכה ומדביקים אותן לאלקטרודות לוח האק"ג המוטבעות בלוח. בדוק שהפרמטרים הפיזיולוגיים (קצב לב, אות נשימה וטמפרטורת גוף הליבה) נרכשים ומוצגים כראוי.
5. הסר שיער משני אזורי המפשעה על ידי מריחת חומר depilatory ולצפות אותם עם מדיום צימוד אקוסטי.
6. הדקו את הגשושית הליניארית UHFUS (תדר מרכזי של 40 MHz) למנוע תלת-ממדי מיוחד המוטמע בתחנת ההדמיה של UHFUS, ומאפשרים תנועה אוטומטית והדרגתית של הגשושית.
7. כיוון נכון והתאם את מיקום בדיקת האולטרסאונד כדי לקבל תמונות קצרות ציר של בלוטת הלימפה המפשעתית (שמאל / ימין), ולמקם את אזור העניין באזור המוקד.
8. סרוק את כל נפח בלוטת הלימפה המפשעתית כרצף של תמונות דו-ממדיות במצב B, כפי שתואר קודם לכן. קבל תמונות ברמות מרובות של בלוטת הלימפה על ידי תנועה ליניארית של המתמר עם גדלי צעדים בקנה מידה מיקרומטרי, כדי ליצור נתונים תלת ממדיים במונחים של לולאות נשימה ולב מגודרות באופן אוטומטי.
9. הגדר את הקלטת התמונה עם הפרמטרים הבאים: מרחק סריקה הנע בין 2 ל -5 מ"מ (בהתאם לגודל בלוטות הלימפה); גודל צעד 44 מיקרומטר, עם תוצאה של 46-114 שלבי סריקה / פרוסות בלוטות לימפה וזמן רכישה של 1-3 דקות לכל חיה. אחסן באופן דיגיטלי את התמונות שנרכשו בפורמט גולמי (DICOM) לצורך ניתוחים לא מקוונים נוספים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ב6. עכברי Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) עכברים	מעבדת ג'קסון	13590
בלו ג'ל	סופט איליה		ג'ל תמיסה אופתלמית
IsoFlo (איזופלורן)	זואטיס		נוזל להרדמה גזית
סיגמא ג'ל	פרקר		אלקטרודה ג'ל
ג'ל טרנסוניק שקוף	טליק סאו		ג'ל אולטרסאונד
Veet	רקיט בנקיזר IT		קרם דפילטורי
מערכת הרדמה כפולה קומפקטית	Fujifilm, Visualsonics Inc.		מערכת הרדמה מבוססת איזופלורן המצוידת בחרוט אף ותא אינדוקציה
MX550S	Fujifilm, Visualsonics Inc.		בדיקה ליניארית UHFUS
Vevo 3100	Fujifilm, Visualsonics Inc.		מערכת UHFUS
תחנת הדמיה Vevo	Fujifilm, Visualsonics Inc.		תחנת הדמיה UHFUS ויחידת ניטור פיזיולוגי מתקדם עם לוח מחומם
מעבדת Vevo	Fujifilm, Visualsonics Inc.		פלטפורמת תוכנה לעיבוד תמונה לאחר אולטרסאונד