מיצוי רשתית מעכבר: הליך כירורגי להשגת רשתית שלמה מעין העכבר

תקציר

מקור: Jiang, K. et al. קביעת נשימה מיטוכונדריאלית וגליקוליזה בדגימות רקמת רשתית Ex Vivo. J. Vis. Exp (2021)

סרטון זה מתאר פרוטוקול לבידוד גביע הרשתית ללא שכבות הכיסוי החיצוניות מגלגל העין של עכבר. רקמת הרשתית המחולצת יכולה לסייע בחקר מסלולים מטבוליים שונים המתרחשים בתאי הרשתית.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. דיסקציה של הרשתית

1. המתת עכבר על ידי חנק CO₂ בהתאם להנחיות מוסדיות בנושא המתת חסד.
   הערה: אין להשאיר את בעל החיים בתא CO₂ יותר מהזמן הדרוש להמתת חסד.
2. יש לחנך את העיניים ולהניח לתוך חיץ PBS 1x עתיק כקרח בצלוחית פטרי ולאחר מכן להניח אותו תחת מיקרוסקופ דיסקציה.
3. בזהירות להסיר, על ידי חיתוך עם microscissors, את שרירי פי הטבעת הנוספים מחוברים מחוץ לגלגל העין לחתוך את עצב הראייה.
4. השתמש במחט 30 גרם כדי לנקב חור בקצה הקרנית (לימבוס); זה משמש כאתר החדרת המספריים. לאחר מכן, השתמש במיקרומספריים דקים לדיסקציה כדי לבצע חתך עגול לאורך קצה הקרנית, המפריד בינה לבין העין האחורית.
5. השתמש במלקחיים חדים כדי להסיר את הקרנית, העדשה ואת הומור הזגוגית הרחק מכוס העין.
6. השתמש במספריים זעירים לדיסקציה עדינה כדי לבצע מספר חתכים קטנים בשכבה הסקלרלית בשולי העין. הימנעו מחיתוך שכבת הרשתית. השתמש בשני מלקחיים חדים כדי להחזיק את הרקמה הסקלרלית בכל צד של החתך ולמשוך בזהירות רבה את השכבה הסקלרלית כדי להסיר אותה מהרשתית העצבית. חזרו על הפעולה סביב העיניים עד להסרת כל לובן העין וקבלת רשתית שלמה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
1X PBS	תרמו פישר	14190-144
מחט 30 מד	BD Precision Glide	305106
ניקוב ביופסיה, 1 מ"מ	אינטגרה מילטקס	33-31AA
תא חנק CO2
מלקחיים דיסקציה-דומונט #5	כלים מדעיים משובחים	11251-10	טיפ ישר
מלקחיים דיסקציה-דומונט #7	כלים מדעיים משובחים	11274-20	קצה מעוגל
מיקרוסקופ דיסקציה
מלקחיים Graefe	כלים מדעיים משובחים	11051-10	קצה מעוקל, משונן
מיקרומספריים	כלים מדעיים משובחים	15004-08	קצה מעוגל