אוסף מחסן שומן לבן וחום מגור עכבר: הליך כירורגי לקצירת רקמת השומן הלבנה ורקמת השומן החומה מגור עכבר

תקציר

מקור: Galmozzi, A. et al. בידוד והבחנה של פרדיפוציטים לבנים וחומים ראשוניים מעכברים שזה עתה נולדו. ג'יי ויס. הוצאה (2021)

בסרטון זה, אנו מדגימים את ההליך הכירורגי לבידוד רקמת השומן הלבן התת עורית ורקמת השומן החומה הבין-סקפולרית מעכבר שזה עתה נולד.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. איסוף ועיכול מחסני שומן (יום 1)

1. הכינו שתי צינוריות של 1.5 מ"ל לכל גור: אחת לרקמת שומן חומה (BAT) ואחת לרקמת שומן לבנה (WAT). הוסף 250 μL של מלח חוצץ פוספט (PBS) + 200 μL של 2x מאגר בידוד (123 mM NaCl, 5 mM KCl, 1.3 mM CaCl₂, 5 mM גלוקוז, 100 mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic חומצה (HEPES), פניצילין-סטרפטומיצין, ו 4% חומצות שומן ללא חומצות שומן אלבומין בסרום בקר) לכל צינור. שמור על פתרונות סטריליים ועל קרח.
2. הכניסו את הגורים לתאים קטנים (למשל, באר אחת של צלחת בת 6 בארות), והניחו אותם על קרח עד שהם הופכים להיפותרמיים. ודאו שאין מגע ישיר בין הגורים לקרח. דקרו כפה עם קצה כדי להבטיח אובדן הכרה והרדימו את הגורים על ידי עריפת ראש באמצעות מספריים חדים.
   הערה: אם עובדים עם גנוטיפים שונים, הכינו צינור נוסף לאיסוף ביופסיית זנב (חתך 3 מ"מ) לגנוטיפ. אם הגנוטיפ מבוצע באופן מיידי, יש לשמור את הגורים המורדמים על קרח עד לנתיחה כדי לאסוף מחסני שומן.
3. לחשב ולשקול את כמות collagenase הדרוש כדי לעכל את כל המחסנים. הוסף 50 μL של 15 מ"ג / מ"ל collagenase סוג I בחיץ בידוד 2x לכל צינור. אין להשעות מחדש את הקולגנאז במאגר בידוד עד שכל הרקמות נאספו.
4. כדי לאסוף וואט תת עורי, חתכו את העור סביב בטנו של הגור (הימנעו מקרע בצפק), ומשכו בעדינות את העור למטה מתחת לרגליים. מבלי לקחת את העור, אספו בזהירות את מחסן השומן, אשר יופיע כרקמה שקופה (P1 או צעירה יותר) או לבנה (P2 ומעלה), דקה ומוארכת המחוברת בחלק הפנימי או מעל הארבע ראשי (איור 1A, B). שוטפים את מחסן השומן ב-PBS ומניחים אותו באחד הצינורות המכילים 250 μL של PBS + 200 μL של 2x מאגר בידוד. שמור על קרח.
   הערה: עכברי P0 ו-P1 מספקים את התשואה הטובה ביותר. בגורי P0-1, מחסן ה-WAT התת עורי כמעט שקוף. בעכברי P2 ומעלה, קל יותר לזהות את המחסן מכיוון שהוא כבר הופך לבן, מה שמעיד על נוכחות של אדיפוציטים לבנים בוגרים לחלוטין, עמוסי שומנים.
5. כדי לאסוף BAT interscapular, למשוך את העור מן השכמות מעל הראש. הרימו את ה-BAT – הרקמה האדומה העמוקה שבין השכמות – ובצעו בזהירות חתכים סביבו כדי לנתק אותו מהגוף (איור 1A, B). בדוק עקביות וצבע; לשטוף עם PBS; מניחים אותו בצינור השני המכיל 250 μL של PBS + 200 μL של 2x מאגר בידוד; ולשמור על קרח.
   הערה: בעת קצירת עטלף מעכברי P2 ומעלה, הסר בזהירות את רקמת השומן הלבנה המקיפה את העטלף. הוא מורכב מסדין דק, רך ולבן של אדיפוציטים הממוקם בין העור לבין ה- BAT, שהוא עמוק יותר בין השכמות.

תוצאות

איור 1: איסוף ועיבוד של רפידות שומן. (A) ייצוג סכמטי של בידוד אדיפוציט ראשוני לבן (למעלה) וחום (למטה). (B) מחסני שומן תת-עוריים לבנים (למעלה) וחומים (תחתונים). בעכברי P0, WAT תת עורי הוא כמעט בלתי נראה, אך ניתן להבחין בו ביום ~ 2 לאחר הלידה. לעומת זאת, ל-BAT יש צבע כהה מובהק אפילו ב-P0. אצל גורים מבוגרים יותר, העטלף מוקף בשכבה שטחית דקה של WAT, הדורשת הסרה בעת ניתוח ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צלחות 6 בארות	קורנינג	353046
BSA ללא חומצות שומן	סיגמא-אולדריץ'	A8806
CaCl2	סיגמא-אולדריץ'	C4901
גלוקוז	סיגמא-אולדריץ'	G7021
HEPES	סיגמא-אולדריץ'	H3375
KCl	סיגמא-אולדריץ'	עמ' 9333
NaCl	סיגמא-אולדריץ'	S7653
עט/סטרפ	גיבקו	15140122
מלקחיים כירורגיים	ROBOZ כלי ניתוח Co	RS-5158
מספריים כירורגיים	ROBOZ כלי ניתוח Co	RS-5880
DPBS, ללא סידן, ללא מגנזיום	גיבקו	14190144