מודל עכבר יילודים לכריתה אפיקלית: הליך כירורגי לקטיעת קודקוד החדר לחקר פוטנציאל התחדשות בלב עכבר יילוד

תקציר

מקור: Li, Y. et al. השתלת מקרופאגים לבביים של עכברי ילודים בעכברים בוגרים. J. Vis. Exp. (2021).

בסרטון זה, אנו מדגימים את ההליך להסרה כירורגית של קודקוד החדר השמאלי של לב עכבר יילוד.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. ניתוח כריתה אפית בעכבר Cx3cr1 ^GFP/+ בן יום אחד ביילוד (רקע C57BL/6)

1. הרדמה
   1. הוציאו את כל גורי העכברים מהכלובים והכניסו אותם לקופסה נקייה ויבשה.
   2. הטמע כל עכבר בקרח במשך כ 2-3 דקות. ודא שיש מחסום דק כגון לטקס או גזה בין הקרח לבין גור העכבר כדי למנוע כוויות קור.
   3. זהה הרדמה מספקת על ידי התבוננות בסימנים הבאים: עור חיוור, חוסר תנועת גפיים וחוסר רפלקס דוושה.
2. ניתוחי בית החזה
   1. קררו מראש את פלטפורמת ההפעלה מברונזה למשך הלילה בטמפרטורה של -20°C כדי לסייע בשמירה על ההרדמה.
   2. הוציאו את העכבר המרדים מקופסת הקרח והניחו אותו על פלטפורמת הפעלה מברונזה. עוגן את העכבר על פלטפורמת ההפעלה במצב שכיבה באמצעות סרט הדבקה רפואי.
   3. שים את פלטפורמת ההפעלה עם העכבר על זה תחת סטריאוסקופ.
   4. יש לחטא את שידת העכבר באמצעות משטח הכנה ספוג בבטדין ו-70% אלכוהול או בהתאם למדיניות המוסדית.
   5. חותכים את העור עם חתך של 1 ס"מ באזור הבין-קוסטלי הרביעי של חלל החזה ולאחר מכן מפרידים את השרירים הבין-קוסטליים באמצעות מספריים מיקרו-כירורגיים עד לגישה ללב.
   6. לחילופין לחץ על החזה והבטן בעזרת שתי מלקחיים עד שהלב יוצא החוצה מהחזה ללא כל נזק מכני.
   7. הניחו את הצלעות מתחת ומעל החתך הקטן כקיבוע טבעי לשיתוק הלב.
3. כריתת קודקוד החדר
   1. אתר את קודקוד החדר השמאלי. חותכים קוטר 1 מ"מ של רקמת קודקוד החדר באמצעות מספריים iridectomy תחת סטריאוסקופ.
   2. ודא כי חדר החדר השמאלי חשוף ולהתחיל לטפטף.
   3. לחץ בעדינות את הלב בחזרה לחלל החזה באמצעות צמר גפן.
   4. תפרו את השרירים, הצלעות והעור באמצעות 8-0 תפרי פרולן.
   5. נקה את העכבר ביסודיות לאחר הניתוח.
4. טיפול לאחר הניתוח
   1. העבר את העכבר מפלטפורמת ההפעלה לשמיכת חימום של 37 מעלות צלזיוס כדי לחמם את הגוף מיד לאחר הניתוח.
   2. אשר אנביוזה של העכבר על ידי התבוננות בסימנים הבאים: שחזור נשימה ספונטנית, שינוי צבע העור מחיוור לוורוד ותנועת הגפיים.
   3. החזירו את העכבר המנותח לאמו לאחר שהתאושש.
   4. ערבבו את העכבר המופעל עם חומרי הקינון של אמו במידת הצורך.
      הערה: חשוב להוציא את כל הגורים בני יום אחד מהאם בבת אחת ולאחר מכן להחזיר את כולם בבת אחת לאחר שכל הגורים מחלימים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ערכת דיסוציאציה של לב ילודים	Miltenyi Bio Tech, טטרו, גרמניה	130-098-373