מודל לימפדמה של זנב מורין: טכניקת In Vivo ליצירת לימפאדמה מתמשכת בזנב מורין

תקציר

מקור: Hassanein, A. H. et al., A Murine Tail Lymphedema Model. J. Vis. Exp. (2021).

סרטון זה מתאר טכניקת in vivo ליצירת לימפאדמה בזנב מורין, הצטברות נוזלים חריגה בחלל הרקמה הבין-תאית המובילה לנפיחות בזנב. המודל מוחל על מנגנוני לימוד וטיפול בלימפדמה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הפרעה כירורגית בלימפה זנב עכבר

1. השתמש בעכברי C57BL/6 בני שמונה שבועות בעלי התפלגות מגדרית שווה.
2. הניחו עכבר בהרדמה כללית בתא אינדוקציה עם 3-4% איזופלורן ב-100% חמצן ולאחר מכן טשטוש תחזוקה ב-1-3% במהלך ההליך.
3. יש לתת 0.5 מ"ג/ק"ג שחרור מושהה (SR) בופרנורפין תת עורית לשליטה בכאב.
   הערה: תרופות משככי כאבים נוספות שניתנו postop: Carprofen פעם אחת כל 24 שעות לפחות 48 שעות ו Bupivacaine פעם אחת או לאחר ביצוע החתך או לפני סגירת החתך, מוחל על ידי טפטוף על קצוות העור (נמשך עד 4 – 6 שעות).
4. מקמו את העכבר בצורה גבית והכינו את הזנב עם 70% אלכוהול איזופרופיל.
5. יש למדוד את קוטר הזנב לפני ההליך במרווחים של 5 מ"מ החל מ-20 מ"מ מבסיס הזנב באמצעות קליפר. מדידות אלה ישמשו לחישוב נפח באמצעות משוואת החרוט החתוך.
6. סמן כריתה היקפית של 3 מ"מ על הזנב 20 מ"מ מהבסיס.
7. בצע כריתת עור קפדנית בעובי מלא של 3 מ"מ עם להב כירורגי סטרילי (מידה 15), תוך השארת כל כלי הדם שמתחתיו ללא פגע תחת הגדלה מיקרוסקופית כירורגית. חותכים את הסימן ההיקפי העליון (20 מ"מ מבסיס הזנב) תחילה דרך הדרמיס ולאחר מכן חתך בעובי מלא 3 מ"מ דיסטלי לחתך הראשון
   1. בצע חתך אנכי מאונך בעובי מלא כדי לחבר את שני החתכים. השתמש בטנדר עדין עם שיניים כדי לתפוס קצה מוביל והשתמש במיקרומספריים כדי לנתח בזהירות עמוק בתוך מישור האווסקולרי לדרמיס ושטחי לאדוונטיה של הווריד.
8. הזריקו 0.1 מ"ל של איזוסולפן כחול (1%) תת עורית פרוקסימלית לקצה הזנב.
9. זהה את שתי תעלות הלימפה הסמוכות לורידי הזנב הרוחביים תחת המיקרוסקופ הניתוחי. הלימפה תופיע כחולה בגלל הזרקת איזוסולפן. Transect את הלימפה באמצעות מספריים microsurgical ישר. השתמש במספריים כדי לנתח בזהירות מישור בין הווריד לרוחב לבין הלימפה. לאחר מכן להעביר את קצה להב מספריים אחד בין כלי הלימפה לבין הווריד לרוחב ולסגור את הלהבים כדי transect כלי הלימפה.
10. הלבישו את פצע הזנב בחבישה סטרילית שקופה. בדוק חתכים לאחר הניתוח מדי יום כדי לוודא שהם אינם נגועים או מדממים ולספק טיפול בפצע במשך שבועיים.
11. שכן את בעלי החיים בנפרד כדי למנוע פגיעה נוספת בזנב וכדי למנוע מבעלי החיים לנשוך זה את זה, מה שיוביל לסיבוכים כירורגיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקרוסקופ כירורגי	Leica, Wetzlar, גרמניה	MSV266
חבישה דבקה (Tegaderm)	3M, סנט פול, מינסוטה	1626 ואט
C57BL/6 עכברים	מעבדות ג'קסון	664
מיקרו-אדסון מלקחיים - 1x2 שיניים	Fine Science Tools (ארה"ב) בע"מ	11019-12
מחט חד פעמית 30GX1	פישר סיינטיפיק	305128
מספריים להפעלה	פישר סיינטיפיק	12-460-796
איזוסולפן בלו (לימפזורין) 50 מ"ג/5 מ"ל	מיילן	67457-220-05