מודל יצירת דלקת בדרכי השתן: טכניקה למתן חיידקים אורופתוגניים בעכבר לפיתוח מודל דלקת בדרכי השתן

תקציר

מקור: Luyts, N. et al., מעקב אורכי אחר דלקות בדרכי השתן והטיפול בהן בעכברים באמצעות הדמיה ביולומינסנציה. J. Vis. Exp. (2021).

בסרטון זה, אנו מתארים את הטכניקה לניהול תוך שלפוחית של חיידקים אורופתוגניים כדי ליצור מודל זיהום בדרכי השתן בעכברים. מודל זה יכול לשמש להבנת התפשטות זיהום חיידקי אורופתוגני בתוך מערכת השתן ואת המנגנונים הקובעים רגישות לזיהומים בדרכי השתן.

פרוטוקול

1. חיסון בעלי החיים

1. הכנת בעלי החיים
   1. בחר את זני העכבר הרצויים בהתאם לשאלת המחקר והזמינות של קווי הסתרה, פרטי ניסוי והבדלים ברגישות לזיהומים בדרכי השתן. יש לזכור כי צנתור transurethral קל יותר בעכברים נקבות. אין להשתמש בבעלי חיים מתחת לגיל 8 שבועות, מכיוון שהם אינם בוגרים מבחינה חיסונית. כאן נעשה שימוש בנקבות עכברי C57Bl/6J בנות 12 שבועות.
   2. הזמינו בעלי חיים זמן רב מראש ותנו להם להתאקלם, באופן אידיאלי במשך 7 ימים. קבץ בעלי חיים בכלובים מאווררים בנפרד, בתנאי אור/חושך סטנדרטיים של 12 שעות.
   3. לגלח את אזור הבטן של בעלי החיים כדי להגביל את אובדן האות. אין להשתמש קרם הסרת שיער, כפי שהוא יכול לשרוף את העור של בעלי חיים במהירות. לרסן את החיה על ידי אחיזה הדוקה של הגפיים האחוריות עם היד הלא דומיננטית תוך גילוח עם היד הדומיננטית. לחלופין, יש להתגלח תחת הרדמה איזופלורנית.
      הערה: בעלי החיים גולחו יומיים לפני ההדמיה, בהתחשב בכך שבעלי החיים יטפחו את האזור המגולח עוד יותר.
   4. ספקו מים ומזון סטנדרטי לאורך כל הניסוי. עם זאת, יש לשלול מבעלי החיים מים שעתיים לפני ההחדרה כדי למזער את נפח שלפוחית השתן במהלך ההחדרה.
   5. הרכיבו קצה אנגיוקטטר סטרילי 24 גרם על מזרק 100 מיקרוליטר ומלאו את המזרק בתמיסה חיידקית.
2. החדרת בעלי החיים
   1. הכניסו את בעלי החיים לתא זירוז והרדימו אותם באמצעות שאיפת איזופלורן עם חמצן טהור כגז נשא (אינדוקציה ב-3% ותחזוקה ב-1.5%).
   2. הניחו בעל חיים אחד על משטח עבודה במצב שכיבה ושמרו על הרדמה איזופלורנית יציבה באמצעות חרוט אף במהלך ההחדרה. יש למרוח את משחת העיניים.
   3. לגרש את השתן השיורי על ידי הפעלת דחיסה עדינה וביצוע תנועות מעגליות על האזור suprapubic. נקו את הבטן התחתונה עם 70% אתנול לפני ההחדרה.
   4. לשמן את קצה הצנתר במי מלח רגילים. הניחו את האצבע המורה של היד הלא דומיננטית על הבטן ודחפו אותה בעדינות כלפי מעלה. התחל את הצנתור של השופכה בזווית של 90° (אנכית) ולאחר שנתקלת בהתנגדות, הטה אותה אופקית לפני הכנסתה נוספת (0.5 ס"מ).
      הערה: לעולם אל תדחפו את הצנתר בכוח, מכיוון שזה יגרום נזק לשופכה. תנועות סיבוב עדינות יכולות להועיל בהחדרת קטטר. מצד שני, חוסר התנגדות בדרך כלל מצביע על החדרה שגויה לנרתיק.
   5. בצע החדרה איטית (5 μL/s) של 50 μL של החיסון החיידקי (2 x 10⁷ CFU).
      הערה: נפחים גבוהים יותר או החדרה מהירה יותר עלולים לגרום לריפלוקס לכליות. במהלך תרגול הטכניקה, דיו כחול יכול לשמש להערכת ריפלוקס.
   6. לאחר ההחדרה, יש לשמור את המזרק והצנתר במקומם למשך מספר שניות נוספות ולאחר מכן לסגת לאט כדי למנוע דליפה. תעד כל חריגה כגון כמות גבוהה של דליפה או בשר מדמם והרחק בעלי חיים, במידת הצורך.
   7. מקם את בעל החיים במצב שכיבה בחרוט האף של תא ההדמיה וחזור על השלבים הקודמים 1.1.1-1.1.6 עבור כל בעלי החיים הנותרים. יש להשתמש בצנתר אחד לכל קבוצת ניסוי. יש לוודא את המשך ההרדמה ולמזער את הזמן בין בעל החיים הראשון לאחרון.
   8. במידת הצורך, לתת אנטיביוטיקה או תרופות ניסיוניות, לפני או אחרי ההדמיה (שלב 3). לדוגמה, כדי לנהל enrofloxacin, להוסיף 40 μL של תמיסת enrofloxacin (100 מ"ג / מ"ל) 3.96 מ"ל של מלוחים פיזיולוגיים כדי לקבל דילול 1/100. יש להזריק 100 μL/10 גרם תת עורית בשעות 9:00 ו-17:00 כדי לתת 10 מ"ג/ק"ג אנרופלוקסצין פעמיים ביום במשך 3 ימים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Aesculap דאעש	אסקולאפ	GT421	גוזם שיער, עם מכסה GT608
וופורייזר הרדמה	מכשיר הרווארד מוגבל	לא ישים	https://www.harvardapparatus.com/ harvard-apparatus-anestheticvaporizers.html
BD Insyte Autoguard 24 GA	ב.ד.	382912	אנגיוקטטר צהוב, השתמש בקצה פלסטיק סטרילי להחדרה
עכברי C57Bl/6J	ג'נוויאר	לא ישים
מלח חוצץ פוספט של Dulbecco, Gibco	תרמופישר סיינטיפיק	מספר נכס 14040-083
אתנול 70% רווי 5L	VWR הבינלאומי	85825360
מזרק Hamilton GASTIGHTE, נעילת פיתוי PTFE, 100 מיקרוליטר	סיגמא-אולדריץ'	26203	כדי להבטיח החדרה איטית של חיידקים של 50 μL
איזו-וטרינר 1000 מ"ג/גרם	מוצרים וטרינריים של Dechra	לא ישים	איזופלורן