מאמר שיטה

מודל פצע מורין מונחה קולונוסקופי: שיטה לבידוד מיטת פצע המושרה ביופסיה מהמעי הגס כדי להבין את תהליך הריפוי

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Montrose, D. C., et al. ביצוע ביופסיות צביטה מונחות קולונוסקופיות בעכברים והערכת שינויים ברקמה הבאים. J. Vis. Exp. (2021).

בסרטון זה, אנו מתארים הליך לבידוד מיטת הפצע המושרה על ידי קולונוסקופיה, בנקודת זמן מתאימה לניתוח מולקולרי מפורט. ניתוח זה מסייע להבין את תהליך ריפוי הפצע במצבים דלקתיים של מערכת העיכול.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. איסוף מיטת הפצע לאנליזה מולקולרית

  1. הרדימו עכברים באמצעות חנקCO2 ואחריו נקע צוואר הרחם (או טכניקה מקבילה) ביום שנבחר לאחר הביופסיה.
  2. קצרו את האזור הדיסטלי של המעי הגס על ידי פתיחת העור ושריר הבטן כדי לחשוף את חלל הגוף. מניחים מספריים סגורים מתחת למעי הגס ומרימים בעדינות כדי לשחרר אותו מהמזנטריה הבסיסית ואז חותכים את המעי הגס בנקודת האמצע שלו ובפי הטבעת כדי להסיר אותו מהעכבר.
  3. שטפו את תכולת הצואה באמצעות מחט גבאג' של חולדה המחוברת למזרק בנפח 20 מ"ל מלא ב-PBS 1x קר כקרח, ואז הניחו את המעי הגס על נייר פילטר.
  4. יש לפתוח את המעי הגס לאורכו על נייר פילטר ולוודא שהצד המזנטרי פונה כלפי מטה כנגד נייר הסינון. יש למרוח 0.2% מתילן כחול על הרירית באמצעות פיפט לחיצה, כאשר הרקמה עדיין על נייר הפילטר, ולאחר מכן לנקז את עודפי המתילן הכחול. הסתכלו על המעי הגס תחת מיקרוסקופ מנתח ואתרו את מיטת הפצע (איור 1A).
  5. בעזרת מספריים מיקרו קשתית בקוטר 4 אינץ', חתכו מסביב לקצה מיטת הפצע (איור 1A, עיגול מקווקו) תוך זהירות שלא לחתוך לתוך שכבת השריר (אלא אם כן רוצים בשריר) והעבירו את מיטת הפצע המנותחת לצינור באמצעות פינצטה עדינה להקפאת הצמדה או שיטת אחסון רצויה.
    הערה: כמות הרקמה שנאספת באופן זה מספיקה לחילוץ RNA לניתוח RNA-seq או שווה ערך.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: Ex vivo ותמונות חתוכות של מיטת פצע. (A) המעי הגס נקצר מעכבר יומיים לאחר הביופסיה, הוכתם ב-0.2% מתילן כחול וצולם תחת מיקרוסקופ מנתח. העיגול המקווקו מציין את שולי מיטת הפצע. הקו השחור מציין את המיקום הנכון לחיתוך מיטת הפצע/המעי הגס לפני ההטבעה לחתך. (B) תמונה מייצגת של קטע מוכתם ביד של מיטת פצע. כוכביות מציינות מיטת פצע וחצים מציינים קריפטות שלמות הסמוכות למיטת הפצע המציינות את גבולות האזור הפג...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מלקחיים ביופסיה, 3 Frקרל סטורץ61071ZJ
איזופלואורןקובטרוס2905
מתילן כחולסיגמא-אולדריץ'M9140
מספריים של קשתית המיקרואינטגרה18-1619
סקלפאל עם להב #10היל-רום372610

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Methylene BluePBS

מאמרים קשורים