יצירת מודל לולאת מעי גס פרוקסימלי של עכבר: הליך כירורגי ליצירת לולאת מעי גס פרוקסימלית ומדידת חדירות המעי על ידי זיהוי סמנים פלואורסצנטיים בסרום לאחר הזרקה תוך לומינלית

תקציר

מקור: Boerner, K. et al. Functional Assessment of Inpetinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in עכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת. J. Vis. Exp. (2021).

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי ליצירת לולאת מעי גס פרוקסימלית של עכבר או קטע pcLoop ואחריו הזרקה intraluminal של סמנים פלואורסצנטיים לתוך קטע כדי לחקור את חדירות אפיתל המעי.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. יצירת לולאת המעי הגס הפרוקסימלי (pcLoop)

1. הכנת העור: לשפשף פרווה של קו האמצע של הבטן עם מקלוני אלכוהול או ספוג גזה ספוג עם אתנול 70%. אין להרטיב שטח רחב של פרווה עם אלכוהול כדי למנוע היפותרמיה.
2. באמצעות מספריים, לבצע laparotomy קו האמצע. בצע חתך אנכי באמצע הבטן (כ 2 ס"מ אורך) ולחשוף את הצפק. היזהר לא לפגוע באיברים תוך בטניים.
3. מניחים גזה כותנה רטובה חתוכה מראש על החלל התוך בטני החשוף.
4. השתמשו במקלוני צמר גפן רטובים כדי לנייד ולהוציא החוצה את הצאקום. בזהירות מניחים את caecum על גזה כותנה רטובה.
   הערה: Caecum ממוקם ברביע הקאודלי השמאלי של חלל הבטן ברוב העכברים ללא תלות במין החיה.
5. בעזרת מקלוני צמר גפן רטובים, יש למרוח את כל האילאום ולהניח אותו על גבי גזה רטובה מצמר גפן. זהה את המעי הגס הפרוקסימלי ואת אספקת הדם הממוקמת במזוקולון. גייסו את המעי הגס הפרוקסימלי ובעזרת מלקחיים עדינים צרו את הרצועה הראשונה באזור ללא כלי דם במזוקולון במרחק של כ-0.5 ס"מ דיסטלי מהצאקום (איור 1B).
6. מדדו 2 ס"מ מהליגטורה הראשונה וצרו ליגטורה שנייה באזור ללא אספקת דם במזוקולון (איור 1C).
7. בעזרת מספריים עדינים שנחתכו בזהירות ליד כל קשירה כדי לבודד pcLoop.
   באורך 2 ס"מ הערה: בעזרת מספריים עדינים שנחתכו בזהירות ליד כל קשירה כדי לבודד את הלולאה האיליאלית בקוטר 4 ס"מ, תוך שמירה על אספקת דם שלמה וקרום מזנטרי., חשוב לחתוך את שני הקצוות כדי לבודד pcLoop שמנוקה בעדינות מתכולת לומינל. בזהירות לחתוך דרך רקמת המעי הגס mesocolon כדי למנוע כלי קטן דימום לתוך לומן המעי. במידת הצורך, השתמש בצריבה תרמית כדי להגביל את הדימום באזור החתך.
8. שטפו בעדינות את pcLoop עם HBSS חם כדי להסיר צואה באמצעות צינור הזנה צהוב גמיש המחובר מזרק 10 מ"ל (הכינו מזרק 10 מ"ל מלא HBSS חם וחברו לצינור הזנה צהוב. מזרק זה ישמש ללחות רקמות חשופות במהלך הניתוח).
9. קשרו את שני הקצוות החתוכים של ה-pcLoop הסמוק באמצעות תפר משי.
10. השתמש מזרק 1 מ"ל עם מחט 30G כדי להזריק לאט 200 μL של מגיב כגון FITC-dextrans (1 mg / mL ב HBSS). שמור על תמיסת FITC-dextran שאינה בשימוש מוגנת מפני אור כדי להכין את העקומה הסטנדרטית לאחר איסוף הסרום). ה-pcLoop יתנפח ויגרום להתנפחות מתונה של הרירית (איור 1D).
    הערה: הזריקו את המגיב לתוך לומן pcLoop בצד הנגדי של העורק mesenteric. ודא עקביות בין בעלי חיים וליצור pcLoop באורך 2 ס"מ כדי להבטיח התנפחות שווה של הרירית.
11. השתמשו בצמר גפן רטוב כדי להחזיר בעדינות את ה-pcLoop, האילאום והצאקום המחוברים לחלל הבטן.
12. השתמש במחזיק מחט, מלקחיים אנטומיים ותפרי משי 3.0 שאינם נספגים עם מחט חיתוך לאחור כדי לסגור את דופן הבטן.
13. הניחו את בעל החיים בתא הרדמה מווסת טמפרטורה למשך תקופת הדגירה.

תוצאות

איור 1: מודל לולאת המעי הגס הפרוקסימלי. (A) סקירה סכמטית של מודל pcLoop. הלפרוטומיה החציונית מבוצעת בעכברים תחת הרדמה המונחים על לוח ניתוחים מבוקר טמפרטורה. (B) יציאה של caecum (*), המעי הגס הפרוקסימלי, mesocolon ו ileum. מזוהים שני אתרים מתאימים לקשירה (1,2). (C) הליגטורה הראשונה (1) ממוקמת קרוב לקקום והליגטורה השנייה (2) ממוקמת 2 ס"מ יותר דיסטלית מ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ציוד וחומרים
מקלוני אלכוהול BD	ב.ד.	326895
מזרק שחפת BD 1 מ"ל ללא מחט	ב.ד.	309659
מחט BD PrecisionGlide, 25G x 5/8"	ב.ד.	305122
מחט BD PrecisionGlide, 30G x 1/2"	ב.ד.	305106
מוליך צמר גפן (צמר גפן), 6 אינץ', סטרילי	פישר סיינטיפיק	25806 2WC
ספוגי גזה במילוי כותנה Dynarex, לא סטריליים, 100X20 ס"מ	מדקס	3249-1
וופורייזר הרדמה EZ-7000 (מערכת קלאסית, כולל יחידות חימום)	מערכות E-Z	EZ-7000
מגבונים קטנים (מגבון רקמות)	פישר סיינטיפיק	06-666
מספריים עדינים של מוריה	FST	14370-22
משחה וטרינרית Puralube, חומר סיכה סטרילי לעין	Dechra	12920060
מלקחיים טבעתיים (מלקחיים רקמתיים קהים)	FST	11103-09
Roboz Surgical 4-0 משי שחור קלוע, 100 YD	פישר סיינטיפיק	NC9452680
מלקחיים Semken (אנטומי מלקחיים)	FST	1108-13
Sofsilk לא נספג מצופה שחור תפר משי קלוע גודל 3-0, 18 אינץ', מחט 19 מ"מ אורך 3/8 עיגול חיתוך הפוך	הנרישיין	SS694
מלקחיים עדינים לסטודנטים, זוויתיים	FST	91110-10
מזרק 10 מ"ל PP/PE ללא מחט	מיליפור סיגמא	Z248029
ריאגנטים
איזופלורן	הלוקרבון	12164-002-25
Fluorescein Isothiocyanate-Dextran, משקל מולקולרי ממוצע 4.000	סיגמא	60842-46-8