קציר בלוק לב-ריאה מארנב: הליך כירורגי לאחזור בלוק לב-ריאה תפקודי ממודל ארנב

תקציר

מקור: Pacheco-Baltazar, A., et al. Isolated Lung Perfusion System in the Rabbit Model. J. Vis. Exp. (2021)

בסרטון זה, אנו מראים הליך לקצור בניתוח בלוק לב-ריאה תפקודי ממודל ארנב. הבלוק שנקטף יכול לשמש למחקרים פיזיולוגיים, פרמקולוגיים או ביוכימיים נוספים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. ציוד והכנת מנגנון.

1. סידור ציוד:
   1. ערכו שולחן ניתוחים בגודל בהתאם למשקל הארנב.
   2. הרכיבו את כיסוי בית החזה המלאכותי על עמוד הפלדה עם תא הזכוכית מתחתיו ומאוורר עם משאבת גלילה בצדדים.
   3. ודא כי הכיסוי נוטה בקלות כך שצינורית קנה הנשימה תהיה בקו אחד עם קנה הנשימה כדי לאפשר חיבור מהיר יותר.
2. בית חזה מלאכותי:
   הערה: זהו חלק חיוני של המערכת. החדר מורכב מתא זכוכית עם מעיל מים אטום על ידי כיסוי מיוחד. הכיסוי פועל כמחזיק האיבר עם החיבורים לצינור קנה הנשימה וכלי הדם המשובצים בו.
   1. הגדר סילון ונטורי המופעל על ידי אוויר דחוס כדי ליצור את הלחץ השלילי בתוך בית החזה המלאכותי.
      הערה: מודול בקרת האוורור (VCM) מאפשר התאמות נפרדות של לחצים השראתיים וסופיים, כמו גם קצב הנשימה והיחס בין משך ההשראה למשך המחזור הכולל.
3. מנגנון:
   1. ודא שמכשיר הפועל בדרך כלל מורכב מעמוד פלדה ראשי המורכב על לוח בסיס המחזיק את בית החזה המלאכותי, כאשר מתמר הפנאומוטכומטר ומתמר המשקל ממוקמים מעליו ומאחורי הסליל המתחמם מראש עם מלכודת בועות.
   2. חבר מתמר לחץ דיפרנציאלי אחד לפנאומוטכומטר ואחר ללחץ התא. הגדר זוג מתמרי לחץ שונים מאחורי בית החזה כדי למדוד זילוח ולחץ ורידי.
   3. חבר את מלאי ההחלפה מתחת למחמצן באמצעות אלקטרודה מפולסת ומערכת האוורור שליד המנגנון.

2. מיצוי כירורגי של בלוק לב-ריאה.

1. הרדמה:
   1. השתמש בשילוב של תרופת הרגעה (xylazine) ו barbiturate (pentobarbital).
      הערה: ניתן להשתמש בקוקטיילים שונים עם הרדמה ללא השפעה על תוצאות הניסוי.
   2. ראשית, הרגיעו את הארנבים הניו זילנדים הבריאים בזריקה תוך שרירית אחת של קסילזין הידרוכלוריד (3-5 מ"ג/ק"ג). ודא כי הארנבים נשארים רגועים ונינוחים כדי לאפשר מניפולציה נוספת לאחר מספר דקות של ההזרקה.
   3. לאחר הטשטוש, יש להשתמש בוורידי האוזן השוליים (הרוחביים) כגישה להרדים את הארנבים בהזרקה תוך ורידית של נתרן פנטוברביטל (28 מ"ג/ק"ג).
2. ניטור:
   1. כדי למנוע הרדמה מספקת או דיכאון מוגזם של תפקודי לב ונשימה, לפקח על הפרמטרים הבאים. כדי להעריך את עומק ההרדמה, בצע בדיקת צביטת בוהן.
   2. ודא כי הקרום הרירי הוא ורוד. גוונים כחולים או אפורים מצביעים על היפוקסיה.
   3. ודא כי קצב הלב הוא בין 120-135 פעימות / דקה, וכי טמפרטורת הגוף אינה יורדת מתחת 36.5 ° C.
3. מיקום בעלי חיים:
   1. גלחו את פלג גופו העליון של הארנב והניחו את בעל החיים על שולחן הניתוחים במצב שכיבה. הניחו את מערכת האוורור ליד השולחן, מאחורי ראשו של הארנב, כדי לאפשר חיבור מהיר של הצינורית לאחר קנה הנשימה כדי למנוע נזק טיסלרי.
4. חתך וטרכאוטומיה:
   1. לנתח את העור עם חתך קו חציוני הגחון של 3-5 ס"מ מן הסרעפת עד הצוואר.
   2. בעזרת המספריים המנתחים, חותכים את 2/3 קנה הנשימה הקדמי בין שתי טבעות סחוס כדי להחדיר את צינורית קנה הנשימה דרך קרום קנה הנשימה.
   3. הכנס 5 מ"מ (קוטר חיצוני; OD) צינורית קנה הנשימה דרך קרום הנשימה הסיבי ולהשתמש בתפר משי 4-0 כדי לתקן אותו בזהירות.
   4. הניחו מלקחיים או פינצטה מתחת לקנה הנשימה כדי להבטיח שהצינורית לא תתכופף כנגד קנה הנשימה.
5. אוורור בלחץ חיובי:
   1. כל עוד הריאות נשארות מחוץ לבית החזה המלאכותי, השתמשו במשאבת נשימה קטנה כדי לאוורר לחץ חיובי על מנת למנוע קריסת ריאות במהלך הניתוח.
   2. יש להתחיל אוורור דרך צינורית קנה הנשימה המחוברת למשאבת הנשימה במהירות לאחר קנה הנשימה ולפני פתיחת בית החזה.
   3. הגדר את נפח הגאות על 10 מ"ל/kg.
      הערה: בהתאם למערך הניסוי ולמודל בית החזה המלאכותי, ספקו אוורור בלחץ חיובי על ידי אותה משאבת אוורור המשמשת למתן לחץ שלילי או משאבה אחרת, המעניקה קנולציה חוזרת מהירה.
6. כריתת בית החזה וכריתת בית החזה:
   1. כדי לגשת לחלל בית החזה, השתמש באזמל או מספריים כדי לפתוח את דופן בית החזה ולבצע סטרנטומיה מדיאלית עד השליש העליון של בית החזה.
   2. החזק את חצאי בית החזה פתוחים על ידי שני retractors. מספר דשי ריאות מקיפים בדרך כלל את הלב.
   3. למקם את הווריד קאווה העליון והנחות ולהפנות אותם עם חוטים.
   4. לפני הוצאת החיה, יש לזהות את החדר הימני ולהזריק 1000 UI/kg של הפרין.
   5. מיד לאחר ההזרקה, לקשור את הווריד קאווה העליון והנחות עם החוט מראש לולאה ולבצע exsanguination.
7. קציר לב-ריאה:
   1. קצרו את בלוק הלב ריאה בעדינות ובמהירות. השתמש בדיסקציה דיגיטלית ישירה או מספריים קפיציים כדי להפריד את רקמת החיבור כדי להסיר את הריאות מבית החזה.
   2. לנתח את כלי הדם באזור, כמו גם את הוושט.
   3. חותכים דרך עצם החזה המדיאלית כדי להאריך את עצם החזה המדיאלית לכיוון צינורית קנה הנשימה, ומשחררים את קנה הנשימה משני הצדדים מרקמת החיבור.
   4. כעת, כרתו את קנה הנשימה מעל צינורית קנה הנשימה. משכו בעדינות את הצינורית בציר גולגולתי כאשר הקיבוע הגבי של קנה הנשימה והריאות מנותח.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צינורות 2-Stop Tygon E-Lab, ID, 12/pack, שחור/לבן	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-1864
מתאם לאוורור בלחץ חיובי ב- IPL-4	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4312
אספקת גז חלופית ללא לחץ עבור IPL-4: לספק לקנה הנשימה תערובת גזים שונה מאוויר החדר במהלך אוורור שלילי	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4309
יחידת בסיס לארנב לחזיר עוברי ריאה מבודדת מחוררת	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4138
סרום בקר A2: D41אלבומין אבקה lyophilized	סיגמא	3912	500 גרם
מתמר דיפרנציאל בלחץ נמוך DLP2.5, טווח +- 2.5 cmH2O, מחבר HSE	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-3882
מתמר לחץ דיפרנציאלי MPX, טווח +- 100 cmH2O, מחבר HSE	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-0064
אתנול מוחלט HPLC כיתה	קלדון
משאבה פריסטלטית של הרווארד P-230 (עם תיבת בקרה והנעה מוטורית P-230)	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	70-7001
Pneumotachometer ליניארי מחומם 0 עד 10 ליטר / דקה טווח זרימה	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	59-9349
בקר חימום עבור פנאומוטכומטר יחיד 230 וולט AC , 50 הרץ	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	59-9703
הפארין	פיזה		ממשק משתמש 5000
מערכת ליבה IPL-4 עבור ארנב מבודד לריאה חזיר עוברי, 230 V	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4296
מחזור תרמוסטטי Lauda, סוג E-103, 230 וולט/50 הרץ, נפח אמבטיה 3 ליטר, טווח טמפרטורות 20 עד 150°C	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-0125
אפשרות בקרת אוורור בלחץ שלילי עם וסת לחץ עבור IPL-4	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4298
ארנבים בניו זילנד
PISABENTAL (נתרן Pentobarbital)	פיזה	Q-7833-215
מארז PLUGSYS, סוג 603* 7	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-0045
מודול מונה זמן PLUGSYS TCM	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-1750
מודול מגבר מתמר PLUGSYS (TAM-A)	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-0065
מודול מגבר מתמר PLUGSYS (TAM-D)	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-1793
מודול בקרת אוורור PLUGSYS VCM-4R עם וסת לחץ	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-1755
פרוצין (קסילצין קלורידראט)	פיזה	Q-7833-099
צינורית עורק ריאתי לארנב עם סל, OD 4.6 מ"מ	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4161
סכין אזמל
בקר סרוו לזילוח (SCP)	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-2806
כפפות כירורגיות מס' 7 1/2
כפפות כירורגיות מס' 8
קנולה קנה הנשימה לארנב, OD 5.0 מ"מ	הוגו זקס אלקטרוניק (HSE)	73-4163