העברת מולקולות עוקבות ב- Cisterna Magna: שיטה להעברת מולקולות עוקבות פלואורסצנטיות באמצעות קנולציה ישירה של Cisterna magna בחזיר

תקציר

מקור: Bèchet, N. B., et al. Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs. J. Vis. Exp. (2021).

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול להעברת מולקולות נותב באמצעות קנולציה ישירה של cisterna magna במוח חזיר. שיטה זו מסייעת לדמיין את התפלגות הנוזל השדרתי במערכת הגלימפטית.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. קנולציה והזרקה

הערה: שלב זה דורש לפחות שני אנשים והוא מתבצע כאשר ראשו של בעל החיים מורם וצווארו מכופף.

1. התחל עם חזיר מורדם, מנותח מראש עם cisterna magna נגיש כירורגית.
2. ודא כי אדם אחד מרים ומכופף את הראש והצוואר של בעל החיים בעוד השני ממשש עבור cisterna magna תוך רישום המיקום האנטומי שלה.
3. מכניסים לאט ובזהירות צינורית 22 גרם דרך הדורה אל תוך ה-cisterna magna בזווית אלכסונית לציר האורך.
   הערה: אין להכניס את הצינורית עמוק מדי, שכן זה יכול לגרום נזק למוח. הידיעה כמה רחוק להחדיר את הצינורית מגיעה עם ניסיון בהבנה איך זה מרגיש עבור הצינורית לחדור את הדורה. בעיקרו של דבר, בדיוק כפי שהדורה נוקבה, הצינורית עמוקה מספיק להזרקת נותב מוצלחת. עומק זה הוא כ-3-5 מ"מ אך ישתנה בהתאם לגודל או לגיל החיה. קנולציה מוצלחת צריכה להיות ניכרת באופן מיידי באמצעות הדמיה של CSF ברור ופעימתי העולה על הצינורית. לקבלת התוצאה הטובה ביותר, מומלץ לתרגל מספר שימורים מראש בבעלי חיים מורדמים כדי לקבל את ההבנה של פירסינג דוראלי.
4. מוציאים את המחט מהצינורית ומניחים מכסה על המנעול.
5. ראשית, יש למרוח דבק-על ומאיץ שבו הצינורית נכנסת לרקמה, ולאחר מכן ליישם את המלט הדנטלי. המתן 5 דקות עד שהמלט יתקשה.
6. הסר בזהירות את הפקק מהצינורית וחבר את הקצה הגברי של ברז קו העירוי עם שלוחה של 10 ס"מ, עם הנותב, לצינורית.
7. הזריקו באיטיות את העוקב ביד או באמצעות משאבת מיקרו-עירוי בקצב של 100 מיקרוליטר/דקה. הסירו את ברז הקו התוך-כיווני בהארכה של 10 ס"מ והוחלפו במכסה. כעת יש לראות את הטרייסר פועם בבסיס הצינורית.
   הערה: אם אתה מזריק ביד, עשה זאת עד שהנותב עדיין נראה בפיר הצינורית, בערך 1-2 מ"מ מעל המקום שבו מלט השיניים מכסה את הפיר.
8. לאחר ההזרקה, הניחו שקי חול מתחת לצוואר כדי לשמור על כיפוף מסוים. לאחר מכן הראש עשוי להשתחרר, והחיה נשארת במצב נוטה למנוחה.
9. שחררו את המחזירים השומרים על עצמם ומקמו את השרירים כפי שהם שכבו לפני. חברו את העור מעל השרירים באמצעות מהדקי מגבות כירורגיים.
10. מכסים מהדקי מגבת וחתך עם גזה ולאחר מכן שמיכה כדי להגביל את אובדן החום.
11. יש לאפשר לנותב להסתובב בזמן הרצוי לפני המתת החסד של בעל החיים על ידי הזרקת פנטוברביטל (140 מ"ג/ק"ג). אשר המתת חסד על ידי היעדר צלילי לב בעת ההמלטה עם סטטוסקופ.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
18 גרם מחט	מדיק
1 מ"ל מזרק	פישרסאי	15849152
צינורית 20 גרם	מדיק	נה
צינורית 22 גרם	מדיק	נה
אלבומין בסרום בקר Alexa-Fluor 647 מצומד	תרמופישר	A34785	2 בקבוקונים (10 מ"ג)
CaCl2	זיגמאלדריץ'	C1016
מלט דנטלי	אגנתוס	7508
גלוקוז	זיגמאלדריץ'	G8270
מאיץ CA Insta-Set	BSI-Inc	BSI-151
ברז קו IV, 3 כיוונים עם הארכה של 10 ס"מ	בבראון	נה
KCl	זיגמאלדריץ'	עמ' 9333
עט טוש	נה	נה
MgCl2	זיגמאלדריץ'	M8266
מים מיליקיו	נה	נה
NaCL	זיגמאלדריץ'	S7653
נה"ה 2ת.ד. 4	זיגמאלדריץ'	S8282
NaHCO3	זיגמאלדריץ'	S5761
מלוחים	מדיק	נה
מחזירים לשמירה עצמית	נה	נה
דבק-על	נה	נה
מספריים מעוקלים כירורגיים	נה	נה
מהדקי מגבות כירורגיים	נה	נה