ניטור רב-מערכתי של הפרעות אפילפטיות, בארנבת: שיטה לרישום וידאו סימולטני של EEG, אק"ג, קפנוגרפיה ואוקסימטריה במהלך התקפים מושרים

תקציר

מקור: Bosinski, C., et al. ניטור רב מערכתי לזיהוי התקפים, הפרעות קצב ודום נשימה בארנבים מרוסנים מודעים. J. Vis. Exp. (2021).

בסרטון זה, אנו מדגימים שיטת ניטור רב-מערכתית להערכת הפרעות נוירולוגיות וקרדיו-נשימתיות במהלך הזרקה תוך ורידית של תרופה הגורמת להתקפים. הניטור הסימולטני של פרמטרים של וידאו EEG, ECG, אוקסימטריה וקפנוגרפיה מסייע להבין את השינויים הפיזיולוגיים בזמן אמת הקשורים להתקפים אפילפטיים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. כדי לאפשר לארנבים להתאקלם במרסנים ולחוקר לאשר באופן אובייקטיבי ייצוב של קצב הלב וכלי הדם, מכשיר את כל הארנבים עם חיישני הלב והנשימה והעצבים ולבצע ניטור וידאו רציף במשך > שעה, 1 - 3 פעמים לכל חיה.

2. ניסוי תרופתי תוך ורידי (Pentylenetetrazol, PTZ)

1. כדי לדמיין את וריד האוזן השולי, לגלח את המשטח האחורי של האוזן של הארנב. השתמשו במגבון אתנול 70% לחיטוי האתר ולהרחבת וריד האוזן השולי. זה מצוין על-ידי האליפסה השחורה והמקווקו באיור 1F.
2. בשלב זה, בקש מנסיין אחד לכסות את פניו של הארנב עם היד שלהם כדי להפחית את הלחץ של ההליך לארנב. נסיין שני מקנן בזהירות את וריד האוזן השולי עם אנגיוקטטר סטרילי של 25 גרם.
3. ברגע שהקטטר נמצא בווריד, הניחו פקק הזרקה סטרילי בקצה הצנתר, כך שמחט תוכל להכניס תרופות לווריד. מיקום תקע ההזרקה מסומן על-ידי עיגול כחול באיור 1G.
4. צור סד על ידי עטיפת גזה 4 x 4 אינץ 'עם קלטת, כך שהוא יוצר צורת צינור והנחתו בתוך האוזן של הארנב. לאחר מכן הדביקו את הסד לאוזן כך שהקטטר מאובטח במקומו ונשאר זקוף, בדומה לאוזן שאינה צנתר.
5. להזריק 1 מ"ל של 10 יחידות USP לכל מ"ל של מלוחים heparinized.
   הערה: הצנתר וכלי הדם צריכים להיות נקיים באופן גלוי מהאוויר ולהישאר פטנט. אם הצנתר אינו בכלי השיט, המזרק לא ידחוף בקלות ותהיה הצטברות של מי מלח ברקמה התת עורית.
6. תן לארנבים מינונים מצטברים של PTZ תוך ורידי מ 1 מ"ג / ק"ג ל 10 מ"ג / ק"ג במרווחים של 1 מ"ג / ק"ג כל 10 דקות. רשום בתחילת כל מנה כדי לציין איזו חיה מוזרקת ואת ריכוז התרופה.
   הערה: זה מאפשר להעריך את ההשפעות החריפות והתוספים של מתן PTZ. לחלופין, כדי להעריך עוד יותר את ההשפעות הכרוניות של PTZ במינון נמוך, הארנב מקבל מנות חוזרות בכל ריכוז מינון נמוך, 7 מנות במינון 2 מ"ג / ק"ג, 3 מנות ב 5 מ"ג / ק"ג, ואז 3 מנות ב 10 מ"ג / ק"ג, כל מנה מופרדת על ידי 10 דקות.
7. לאחר כל מנה, עקוב בקפידה אחר וידאו-EEG-ECG-capnography-oximetry עבור כל הפרעות נוירו-לב, חשמליות ונשימתיות וראיות חזותיות לפעילות אפילפטיפורמית. שים לב לשינויים אלה בזמן אמת ובמהלך הניתוח.
   הערה: פעילות ההתקפים מתחילה לעתים קרובות תוך 60 שניות ממתן PTZ.

תוצאות

איור 1: ארנב מחובר לציוד.(A) מיקום אלקטרודות אק"ג, זרוע שמאל מסומנת בנקודה צהובה. זרוע ימין מסומנת בנקודה לבנה. רגל שמאל מסומנת בנקודה אדומה. הקרקע הקדמית לרגל ימין מסומנת על ידי נקודה ירוקה. (B) ארנב בריסון עם אלקטרודות אק"ג ו-EEG מחוברות. (C) ארנב צעיר במשענת עם שינויים מתאימים כדי להתאים לארנב קטן יותר, כולל מאיץ מתחת לארנב, קצף צוואר וצינור PVC ח...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
0.9% נתרן כלורי השקיה, USP - מיכל גמיש	פייזר (HOSPIRA)	7983-09	מדולל
מזרק Luer Lock בנפח 10 סמ"ק עם מחט בגודל 20 גרם x 1 אינץ'	סור-וטרינר	SS-10L2025	משמש כסומק לאחר הזרקת סמים
ספוגי גזה 4x4	פישר סיינטיפיק	22-415-469	מגולגל בצינור לסד האוזן עם אנגיוקטטר
מחשב	Dell	אופטיפלקס 5040	מחשב רכישה
אלקטרודת אק"ג	רית'מלינק	RLSND116-2.5	13 מ"מ 35 מעלות כפוף (0.4 מ"מ קוטר) אלקטרודות פין תת-עורי
אלקטרודת EEG	רית'מלינק	RLSP513	אלקטרודות תת-עוריות בעלות 5 פיתולים בקוטר 13 מ"מ ישר (קוטר 0.4 מ"מ)
EEGLAB (2020)	מרכז שוורץ למדעי המוח החישוביים	גישה פתוחה	יכול לבצע ניתוח ספקטרלי של EEG
מתאם Ethernet-to-Ethernet	לינקסיס	USB3G16	מתאם לחיבור המצלמה למחשב
סומק מנעול הפרין	מדליין	EMZ50051240	כדי לשמור על הפטנט של אנגיוקטטר
אור IR	בוש	EX12LED-3BD-8 ואט	מאפשר הקלטות בחושך
LabChart Pro (2019, גרסה 8.1.16)	אדינסוטרמנטים	לא ישים	ניתוח אק"ג
JELCO PROTECTIV בטיחות I.V. קטטרים, 25 מד	סמיתס מדיקל	3060	משמש לצנתור וריד האוזן השולי
MATLAB (R2019b, עדכון 5)	מת'וורקס	לא ישים	נדרש להפעלת EEGLAB
מיקרופון	סטריאו סוני	ECM-D570P	הקלטה של ביטויים קוליים של התקפים
סרט רפואי מיקרו-נקבוביות, נייר, לבן	3 דקות	1530-1	משמש לאבטחת חוטים וליצירת סד אוזניים
Natus NeuroWorks	נאטוס	LC101-8	תוכנות רכישה וסקירה
Pentylenetetrazol (1 - 10 מ"ג / ק"ג תמיד בנפח 1 מ"ל)	סיגמא-אולדריץ'	88580	דילולים מוכנים במי מלח
מגבר קוונטי	נאטוס	13926	מגבר / דיגיטציה
מגבר Quantum HeadBox	נאטוס	22134	תיבת פיצול של 64 פינים
ריסון ארנב	Plas-Labs	501-TC	ניתן להשיג מעצורי ארנבים בגדלים שונים. 6" x 18" x 6" במחקר זה.
אטב אוזניים SpO2	נונין	61000	PureSAT/SpO2
מתאם חיישן SpO2	נונין	13931	XPOD PureSAT/SpO2
מצלמת SRG-X120 1080p PTZ עם יציאת HDMI, IP ו-3G-SDI	סוני	SRG-X120	מצלמת אימפלה
מזרק שחפת Terumo Sur-Vet 1cc 25G x 5/8" Luer רגיל	סור-וטרינר	13882	משמש להזרקת תרופות תוך ורידי
מנעול לואר תקע הזרקה וטרינרי	סור-וטרינר	SRIP2V	תקע הזרקה להחדרת המחט לתרופות תוך ורידי
Webcol אלכוהול הכנה, סטרילי, גדול, 2-רובד	קובידיאן	5110	להכנת וריד האוזן לפני הצנתור