בידוד כפתורים קורנאוסקלרליים: הליך כירורגי להשגת כפתור קורנאוסקלרלי מעין חזירית

תקציר

מקור: Okurowska, K., et al. הקמת מודל קרנית חזיר Ex Vivo לחקר טיפולים תרופתיים נגד קרטיטיס חיידקית. J. Vis. Exp. (2020).

בסרטון זה, אנו מראים הליך לבידוד כירורגי של כפתור corneoscleral כדי ליצור מודל קרנית חזירית ex vivo. המודל מועיל למחקרים היסטולוגיים, פתולוגיים ופרמקולוגיים בשל הדמיון שלו לעין האנושית.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. עיקור

1. שלב קריטי: יש לחטא את כל המלקחיים והמספריים על ידי השריה למשך שעה בתמיסת 5% (v/v) של Distel במים מזוקקים, לנקות עם מברשת, לשטוף במי ברז ולעקר בתנור בטמפרטורה של 185°C למשך שעתיים לפחות.
2. לעקר את כל כלי הזכוכית והריאגנטים האחרים על ידי autoclaving ב 121 ° C במשך 15 דקות או להכין ריאגנטים על פי הוראות היצרן. בצע את ההליכים הבאים בארון בטיחות מיקרוביולוגי סוג II.

2. אוסף דוגמאות

1. אוסף עיניים חזיריות
   1. גזע לבן גדול זורע, צלב עם חזיר המפשייר שימש. החיות היו המומות בזרם חשמלי והעיניים נחנכו כעבור שעתיים בבית המטבחיים.
   2. שלב קריטי: לאחר ההזרמה, העבירו את העיניים למעבדה בתמיסת מלח סטרילית חוצצת פוספט (PBS) כדי למנוע מהן להתייבש ולעבד אותן מיד עם הגעתן.

3. הכנת כפתור corneoscleral

1. השתמשו במלקחיים סטריליים כדי להחזיק את הרקמה המקיפה את גלגל העין והעבירו אותה לצלוחית פטרי. הסר את הלחמית ואת רקמת השריר סביב גלגל העין על צלחת פטרי באמצעות להב אזמל מס '15 ומלקחיים.
2. מרימים בעדינות את גלגל העין תוך כדי אחיזת עצב הראייה במלקחיים ומעבירים לצנצנת 0.5 ליטר מלאה PBS סטרילית.
3. לאחר שכל העיניים מנוקות מהרקמה שמסביב, העבירו אותן באמצעות מלקחיים סטריליים לצנצנת נוספת של 0.5 ליטר מלאה ביוד פובידון 3% (v/v) ב-PBS והשאירו למשך דקה.
4. מעבירים את גלגלי העיניים לצנצנת 0.5 ליטר נוספת עם PBS סטרילי.
5. השתמש במלקחיים כדי להחזיק את העין עדיין על צלחת פטרי ולעשות חתך ליד הקרנית עם להב אזמל No 10A.
6. שלב קריטי: החזיקו את קצה החתך והשתמשו במספריים כדי להסיר את הקרנית ומשאירים כ-3 מ"מ של לובן עין סביב הקרנית. יש לוודא שהקצה החד של המספריים אינו חודר את הקשתית או את הרקמה הכורואידית ונמצא בחלל העל-כורואידי.
7. החזק את כפתור corneoscleral עם מלקחיים ולהשתמש זוג נוסף של מלקחיים קצה מחודד כדי להפריד בעדינות את רקמת uveal.
8. הרימו את הכפתור הקורניאוסקלרלי משאריות הגלובוס ושטפו אותו לזמן קצר בתמיסת יוד פובידון 1.5% (v/v) ב-PBS בצלחת של 12 בארות.
9. מניחים את הכפתור corneoscleral לתוך עוד 12 צלחת באר מלא PBS סטרילי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
סלסטאר 12 צלחת באר	גריינר ביו-וואן	665180
דיסטל	פישר סיינטיפיק	12899357
מלקחיים	פישר סיינטיפיק	15307805
PBS	SLS	עמ' 4417
צלחת פטרי	פישר סיינטיפיק	12664785
פובידון יוד	בית מרקחת Weldricks	2122828
להב אזמל מספר 15	פישר סיינטיפיק	O305
אזמל סוואן מורטון	פישר סיינטיפיק	11849002