מיצוי רקמת ברונכיולרי חזיר: הליך לניתוח חלקי רקמת ברונכיולר מריאות חזיריות

תקציר

מקור: Harrington, N. E. et al. בדיקת יעילות אנטיביוטית במודל Ex vivo של Pseudomonas aeruginosa ו- Staphylococcus aureus Biofilms ב- Cystic Fibrosis Lung. J. Vis. Exp. (2021)

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי לחילוץ רקמות ברונכיולריות מריאת חזיר שנקטף. הרקמה הסימפונית ex vivo יכולה לשמש לפיתוח מודלים של זיהומים לחקר דלקות ריאה כרוניות.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. דיסקציה של רקמת ריאות חזיר ex vivo (EVPL)

1. יש להשיג ריאות מהמקור המיועד בהקדם האפשרי לאחר השחיטה, ולהבטיח שהן נשמרות קרות על ידי הובלה למעבדה בקופסת קירור ביתית.
   הערה: ריאות קרובות יותר ליום השחיטה מראות פחות שטפי דם מהאחסון, אך ניתן להשתמש גם ברקמות שנשמרות באחסון קר עד 4 ימים מהשחיטה. מכיוון שיש לקחת את קופסת הקירור לאטליז או לבית המטבחיים, יש לטהר אותה בהתאם להנחיות המעבדה המקומית לאחר כל שימוש ולאחסן מחוץ למעבדה המיקרוביולוגית כאשר אינה בשימוש, כדי להפחית את הסיכון לזיהום ולהפרת הכלה.
2. עובדים על משטח מעוקר ומתחת ללהבה, מניחים את הריאות על קרש חיתוך פלסטיק נקי מכוסה ברדיד אלומיניום אוטוקלאב. בדוק כי bronchioles להישאר שלם. אם נגרם נזק בבית המטבחיים או במהלך ההובלה, הריאות אינן מתאימות לשימוש.
3. מחממים סכין פלטה מתחת ללהבה ונוגעים בסכין לזמן קצר באזור הריאה המקיפה את הסמפונות כדי לעקר את פני השטח של הרקמה.
4. חתכו את רקמת פני השטח המקיפה את הסמפונות באמצעות סכין גילוח סטרילי. בצע חתכים במקביל הסמפונות כדי למנוע נזק.
5. לאחר שהסימפונות נחשפו, בצע חתך חתך דרך הסמפונות בנקודה הגבוהה ביותר הנראית לעין כדי לשחרר את הסמפונות.
6. באמצעות מלקחיים סטריליים, החזיקו קלות את הקצה החופשי של הסמפונות וחתכו כל רקמה לא רצויה שנותרה באמצעות סכין גילוח סטרילי. בצע חתך חתך סופי על פני הסמפונות לפני כל הסתעפות גלויה כדי להסיר את הסמפונות מהריאות.
7. הניחו את הסמפונות בשטיפת DMEM/RPMI 1640 הראשונה. השאירו את הסמפונות בשטיפה וחזרו על שלבים 1.2-1.5 כדי לקצור חלקים נוספים של סימפונות מאותה ריאה כנדרש כדי להניב מספיק חלקי רקמה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
70% אתנול או דומה עבור עיקור פני השטח וציוד דיסקציה Flamin Gof
רדיד אלומיניום - מעוקר מראש על ידי autoclaving - כדי לכסות את קרש החיתוך שעליו תנתחו את הריאות
מבער בונזן
קרש חיתוך - אנו ממליצים על קרש פלסטיק כדי לאפשר חיטוי קל עם אלכוהול.
קופסת קירור להובלת ריאות למעבדה
מספריים לדיסקציה בגדלים שונים
מדיום הנשר השונה של דולבקו (DMEM)
Fisherbrand 2 מ"ל צינורות מחוזקים	תרמו פישר	15545809
סכין משטחים גדולה
סכיני גילוח רכובים
קרש חיתוך פלסטיק ורדיד אלומיניום ליצירת משטח דיסקציה סטרילי וניתן לניקוי
מכון הזיכרון רוזוול פארק (RPMI) 1640 בינוני
בחירת מלקחיים (מומלץ טיפים קהים)
מיכלים מתאימים לסילוק חדים מזוהמים ורקמת חזיר, בהתאם למדיניות הבריאות והבטיחות של המוסד שלך.