$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. דיסקציה של רקמה
- הכינו את הרקמה החזירית באמצעות מרחב עבודה של דיסקציה לא סטרילית.
- רכשו עיניים חזיריות מבית מטבחיים מקומי, מחקרים בבעלי חיים או מוכר. יש לשמור את העיניים על קרח שקוע ב-PBS במהלך הלידה ולהשתמש מיד עם קבלתו.
- חותכים את הרקמה החוץ-מסלולית וחותכים את הלחמית ומשאירים רק את הקליפה הקורנאוסקרלית ואת עצב הראייה. בצע את הדיסקציה בתנאים לא סטריליים עם מספריים כירורגיים גדולים ומלקחיים באריזת כלים גסה.
- החזירו את העיניים ל-PBS טרי על קרח עד שכל העיניים הדרושות להתקנה ניסיונית ינותחו באופן ראשוני/גס.
- השקיעו את העיניים בתמיסת בטאדין 10% למשך 2 דקות במיכלים סגורים והעבירו באופן אספטי לארון BSC II למיקרודיסקציה (ארון #1). בצע את כל העבודות הבאות בתנאים סטריליים כדי למזער זיהומים במהלך ההתקנה.
- לנתח באופן סטרילי מקטעים קדמיים.
- לאחר 2 דקות בתמיסת בטאדין, העבירו את העיניים לשלוש שטיפות סדרתיות של 1x Antibiotic-Antimycotic-PBS (AA-PBS) כדי להסיר תמיסת בטאדין עודפת מפני השטח של העין תוך שמירה על סטריליות של רקמת העין. לאחר שלוש שטיפות, יש לשמור על הרקמה ב-AA-PBS עד לשימוש נוסף.
- חותכים את העין באמצעות סכין גילוח/אזמל ומספריים מעוקלים. מניחים את העין על גזה ספוגה AA-PBS ויוצרים חתך עם סכין גילוח סטרילי או אזמל ליד קו המשווה של העין (60/40 מפוצל עם 40 בצד הקדמי). באמצעות מספריים כירורגיים מעוקלים, hemisect את העין כדי לבודד את העין הקדמית (חצי הקרנית).
הערה: החתך סביב המקטע הקדמי צריך להיות רציף כדי למנוע קצוות משוננים ומחוספסים בלובן העין שייצרו דליפות נוזלים לאחר ההתקנה בתרבית האיברים.
- השתמש במספריים כאת חפירה כדי לגרוף הומור זגוגי מהקטע הקדמי. הסר את העדשה מהמקטע הקדמי באמצעות מספריים. השאר את המקטעים הקדמיים ב- AA-PBS עד לשלבי דיסקציה נוספים.
הערה: כל העיניים שינותחו יכולות להיות מוחזקות בשלב זה ובזו אחר זו לאורך שארית תהליך הנתיחה.
- בעזרת מיקרוסקופ מנתח חותכים את הקשתית לשורש הקשתית בהדרגה, רדיאלית עד שניתן לראות רשת טרבקולרית (TM). המדיטציה הטרנסנדנטלית היא רקמה פיגמנטית המורכבת מסיבים בעלי אוריינטציה היקפית סביב הקליפה הקורנאוסקלרלית. חתכים זהירים בקשתית לכיוון שורש הקשתית יחשפו את עומק המדיטציה הטרנסנדנטלית מתחת לרקמה.
- חתכו 360° סביב הקשתית באותו עומק כמו החתך הראשוני לתוך הרקמה כדי לחשוף את כל אזור המדיטציה הטרנסנדנטלית. נקו את שאריות הקשתית המכסות את המדיטציה הטרנסנדנטלית לפי הצורך.
- חתכו את שאריות הגוף הריריות האחוריות של המדיטציה הטרנסנדנטלית, והותירו רק רצועה דקה של רקמה אחורית לאזור המדיטציה הטרנסנדנטלית (כ-1 מ"מ).
- מקם את המקטע הקדמי המנותח (AS) במדיה עד להתקנה נוספת בתרבית איברים של מקטע קדמי (ASOC) בהרכבת כלים ארון BSC II (ארון #2).
הערה: ניתן להחזיק את כל העיניים בשלב זה לפני התקנת ASOC אם משתמש יחיד מבצע דיסקציה והרכבת צלחת תרבית איברים.