יצירת מודל קרצינומה של כבד ארנבת: הליך כירורגי להשתלת רקמת גידול באונה השמאלית של הכבד להשראת קרצינומה הפטוצלולרית

תקציר

מקור: Khabbaz, R. C. et al. פיתוח ושימוש אנגיוגרפי במודל Rabbit VX2 לסרטן הכבד. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה, אנו מדגימים השתלה כירורגית של רקמת גידול בכבד ארנב כדי לגרום לקרצינומה הפטוצלולרית. ההליך מסייע לבסס מודל אמין של בעלי חיים לחקר התנהגות הגידול ופיתוח טיפולים לוקואזוריים המכוונים לסרטן הכבד.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. השתלת גידול בכבד באמצעות לפרוטומיה

1. הכן את ארנב הנמען עבור laparotomy. מרדימים את הארנב המקבל באמצעות 45 מ"ג/ק"ג קטמין ו-5 מ"ג/ק"ג קסילזין לזירוז ולאחר מכן אינטובציה ותחזוקה עם איזופלורן 1%-3% לפי הצורך. כאשר הארנב מורדם, לגלח את אתר הניתוח באמצעות קוצץ שיער. נקו את אזור החתך באמצעות שטיפה משולשת עם פילינג בטאדין, תמיסת אתנול 70% ותמיסת בטאדין, ועטפו את הבטן בצורה כירורגית סטרילית.
2. באמצעות להב #15, להתחיל את laparotomy על ידי ביצוע חתך קטן קו אמצע אנכי כלפי מטה דרך העור של הארנב החל מתהליך xiphoid. זה צריך להיות מוחש בקלות נוטה להיות בערך בגודל של אגורה אמריקאית. ראו איור 1.
3. לשקף את העור ולזהות את linea alba. זה צריך להיות פס לבן רפלקטיבי של רקמה נע נחות בקו האמצע. השתמש בדיסקציה קהה כדי לחצות את linea alba ולחשוף את הצפק. ראו איור 2.
   הערה: הצפק מזוהה בקלות מכיוון שהוא יהיה ישירות מעל המעי, אשר ניתן לראות נע עם נשימה.
   זהירות: הצפק נוטה להיצמד למעי הבסיסי עקב מתח פני השטח. שימוש בטראומה קהה כדי לנתח את linea alba עוזר להפיג את הסיכון של ניקוב המעי הבסיסי.
4. לאחר חשיפת הצפק, יש לנתח דרכו בזהירות כדי להיכנס לחלל הצפק. כעת ניתן לזהות את הכבד. כדי לנווט טוב יותר בחלל הבטן, האריכו את החתך בקו האמצע 1\u20122 ס"מ בצורה נחותה דרך העור, השרירים והצפק.
   הערה: הארכת חתך קו האמצע יכולה להיעשות בקלות ובבטחה על ידי החדרה זהירה של המוסט מעוקל לחלל הצפק כאשר הקצה המעוגל פונה באופן שטחי לכיוון הצפק. לאחר מכן לפתוח את hemostat מעט ולהשתמש להב כדי חמוד את הרקמה בין שתי הזרועות של hemostat.
5. זהה את האונה השמאלית של הכבד על מנת לבחור אתר להשתלת גידול. האונה השמאלית אינפרו-לטרלית לאונה המדיאלית היושבת בקו האמצע.
6. לפני שתנסה למשוך את הכבד מתוך חלל הצפק, מניחים חתיכת גזה יבשה באספקט התחתון של החתך.
   הערה: הגזה תספק משטח דבק להניח עליו את הכבד כדי למנוע ממנו לסגת חזרה לתוך הבטן.
7. באמצעות מלקחיים א-טראומטיים או חתיכת גזה רטובה על האצבעות, ציירו בזהירות את האונה השמאלית של הכבד מתוך הבטן דרך החתך והניחו אותה על הגזה היבשה שהונחה קודם לכן. ראו איור 3.
   זהירות: קפסולת הכבד רגישה ויכולה להיקרע בקלות. זה קריטי להיות עדין בעת טיפול באיבר זה כדי למנוע דימום הקופסית, שטפי דם בכבד, ו / או hemoperitoneum בסופו של דבר.
   הערה: בדרך כלל, הכבד יכריז על עצמו חזותית עם כניסתו לחלל הצפק; עם זאת, אם קיבתו של הארנב נפוחה, ניתן לדחוף את הכבד באופן גולגולתי מחוץ לטווח הראייה. אם זה המקרה, הרימו בעדינות את דופן הבטן באמצעות בדיקה קהה. בתרחיש זה, הכבד נוטה להיצמד להיבט הגחוני של הסרעפת עקב מתח פני השטח ולכן יש להפריד בזהירות את הכבד באמצעות בדיקה קהה והוא צריך להתנתק. לאחר מכן השתמש במלקחיים א-טראומטיים כדי למשוך את הכבד החוצה.
8. בשלב זה, להכין את רקמת הגידול להשתלה ולהניח חתיכת גזה רטובה על הכבד כדי להגן עליו.
9. בחר 1\u20122 מ"מ³ חתיכה של רקמת גידול מעובדת מראש להשתלה בכבד. ראו איור 4.
10. באמצעות להב #11, נקב את רקמת הכבד בזווית של 45 מעלות וצור כיס עמוק של 0.5 ס"מ, תוך הקפדה שלא לחדור את האספקט הגבי של קפסולת הכבד. השאירו את הלהב במקומו לאחר ביצוע הנקב. ראו איור 5.
11. הרימו בעדינות את הלהב לכיוון הגחון כדי ליצור כיס קטן במיטת הכבד. קח את חתיכת הגידול באמצעות מלקחיים, הנח את חתיכת הגידול בכיס זה ולאחר מכן להסיר את הלהב.
    הערה: ניתן להסיר את הלהב לפני החדרת חתיכת הגידול, עם זאת, הכבד ידמם וזה יכול לטשטש את אתר הניקוב ולהקשות על זיהוי.
    זהירות: הקפד למזער מגע של הגידול עם כל מבנה אחר כדי למנוע זריעת גידול לא מכוונת. ניתן להימנע מכך גם על ידי הנחת כל הכלים המשמשים לסיוע בהשתלה לאחר מכן.
12. בשלב זה, מניחים חתיכת חומר המוסטטי, כגון קצף ג'ל, על כיס הגידול כדי לקדם המוסטזיס ולמנוע פליטה של חתיכת הגידול.
13. להחזיר את הכבד לבטן, לאחר hemostasis הוא אישר.
14. סגור את דופן הבטן עם תפר פולידיוקסאנון 3-0 על מחט מחודדת באמצעות תפר רציף פשוט וסגור את העור עם 4-0 תפרים פוליגלקטין 910 על מחט חיתוך באמצעות תפר תת עורי רציף.
    זהירות: בעת סגירת דופן הבטן, יש להקפיד שלא לפגוע באומנטום או במבני מעיים אחרים בזריקת תפר.

תוצאות

איור 1: תהליך אקסיפואיד חשוף. העור והשריר התחתון משתקפים כדי לאפשר הדמיה של תהליך הקסיפואיד (חץ שחור) והמעיים (חץ לבן). הכוכב הלבן מציין את כיוון הגולגולת.

איור 2: Linea alba. מעל העור והפאשיה השתקפו כדי לאפשר הדמיה של החץ השחור (linea alba) הזורם בכיו...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
גוזז שיער	וואהל	41870-0438
קטמין	הנרי שיין	56344
קסילזין	אקורן	59399-110-20
Hemostat מעוקל	WPI	501288
מלקחיים א-טראומטיים	סקלאר	52-5077
גזה	מדליין	NON21430LF
15 להבים	סטריס	02-050-015
11 להבים	סטריס	02-050-011
סורג'יסל	אתיקון	1951
3-0 PDS/Taper	אתיקון	Z305H
4-0 Vicryl/חיתוך	אתיקון	J392H