קצירת סחוס מפרקי ממפרקים של תורם סוסים: הליך כירורגי לבידוד רקמת חיבור וסקולרית ממפרקים קדבריים של תורם סוסים

תקציר

מקור: Benders, K. E. M. et al. Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה, אנו מדגימים את מיצוי הסחוס המפרקי ממפרק cadaveric סוסים. הסחוס המפרקי המבודד יכול לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE

1. קצירת סחוס מפרקי ממפרקי התורם (Cadaveric)

1. לפני שלב הקציר, הכינו 1 ליטר של תמיסת שטיפת סחוס, המורכבת ממלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS), בתוספת 100 U/mL פניצילין, 100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין, ו-1% (v/v) אמפוטריצין B.
2. ללבוש כפפות ומעיל מעבדה במהלך כל הליך הקציר, שכן התורם יכול לשאת פתוגנים.
3. להשיג מפרק שלם (cadaveric) לבידוד סחוס.
   הערה: בשלב זה, העור סביב המפרק עדיין שלם. בפרוטוקול זה נעשה שימוש בסחוס סוסים המתקבל מהסוס, אך ניתן להשתמש גם במפרקים אחרים ממינים אחרים.
4. הסר את העור הממוקם סביב אזור העניין המשותף באמצעות אזמל וטוויטר כירורגי. בנוסף, להסיר עודף שומן ורקמת שריר, במידת הצורך, מבלי לפגוע במפרק הבסיסי. לחלופין, העבירו את הגופה המוכנה לארון בטיחות ביולוגי.
5. כדי לבצע ארתרוטומיה, כלומר היפרדות של המפרק, ראשית להגדיר את המיקום שבו המפרק מתבטא על ידי ביצוע הארכה וכיפוף של המפרק.
6. הסר בזהירות שכבות נוספות של שומן, שרירים וגידים בעזרת אזמל ופינצטה כירורגית כדי לפתוח את אזור המפרק.
7. בצע חתך כדי להגיע לחלל המפרק.
   הערה: חלל המפרק מלא בנוזל סינוביאלי, אשר יכול לטפטף מהחלל בעת ביצוע חתך נכון.
8. ממשיכים לפתוח את המפרק לחלוטין על ידי חיתוך דרך הגידים ששומרים על המפרק יחד.
9. בדוק את הסחוס לאיתור נזק מקרוסקופי.
   הערה: אם לסחוס המפרקי אין מראה מבריק וחלק או אם ניכרים שלפוחיות, שסעים או פגמים, יש להשליך את הסחוס.
10. השתמש באזמל סטרילי כדי להסיר את הסחוס מהעצם הסובכונדרלית. חתכו את כל הדרך עד לעצם הסובכונדרלית כדי להסיר גם את האזור העמוק של הסחוס (איור 1). כדי למנוע מהסחוס להתייבש, טפטפו באופן קבוע תמיסת שטיפת סחוס על הסחוס.
    הערה: בשלב זה, גודל פרוסות הסחוס לא משנה.
11. אספו את פרוסות הסחוס בצינורות של 50 מ"ל שהכילו תמיסת שטיפת סחוס שהוכנה בעבר (איור 2A).
12. לאחר איסוף הסחוס מכל תחומי העניין, מקפיאים את פרוסות הסחוס בחנקן נוזלי למשך 5 דקות.
13. מעבירים את פרוסות הסחוס לצינורות של 50 מ"ל ומיד מעבירים את פרוסות הסחוס למשך 24 שעות במייבש הקפאה. כוונו את מייבש ההקפאה ל-0.090 mbar בקירוב בזמן שהמעבה מכיל -51°C (איור 2B).
14. אחסנו את פרוסות הסחוס במקום יבש ובטמפרטורת החדר עד לשימוש נוסף.

תוצאות

איור 1: ברך סוסים לאחר הסרת סחוס בעובי מלא. הסחוס מוסר מהקונדילים באמצעות אזמל עד שמגיעים לשכבת הסחוס המסוידת שלא ניתן לחתוך באמצעות אזמל.

איור 2: שלבים רציפים ביצירת חלקיקי מטריצה שמקורם בסחוס דה-צלולרי. (A

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מפרק קדברי			ניתן להשיג אותו כחומר מנוחה מהקצב המקומי או מהמרכז הווטרינרי.
מלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS)
פניצילין-סטרפטומיצין	גיבקו	15140
אמפוטריצין ב	תרמו פישר סיינטיפיק	15290026
חנקן נוזלי
מייבש בהקפאה	סלמנקיפ	אלפא 1-2 LD פלוס
צנטריפוגה (עבור צינורות 50 מ"ל)	אפנדורף	5810R
אזמל
מחזיק אזמל
משוט קטן