בידוד אבי העורקים החזירי: הליך כירורגי להסרת אבי העורקים החזי מחזירים מיניאטוריים לניתוח במורד הזרם

תקציר

מקור: Zhao, Y., et al. בידוד ותרבית של תאי אנדותל אבי העורקים הראשוניים מחזירים מיניאטוריים J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה אנו מדגימים הליך להסרה כירורגית של אבי העורקים מחזירים זעירים. תאי אנדותל שנקצרו מאבי העורקים המבודדים האלה יכולים לעבור תרבית נוספת בתנאי מבחנה כדי לחקור קרישה ותגובות חיסוניות.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. ניתוח והכנה לבידוד תאי אנדותל של אבי העורקים החזירי

1. חיטוי חדר הניתוח באור UV למשך שעה וחיטוי רפואי 84 נוזל (תכולת הכלור הזמינה היא 4.0% - 5.0%, טבלת חומרים) לפני ביצוע ניתוח.
2. לאחר שהחזיר המיניאטורי קיבל זריקה תוך-שרירית שנוצרה על-ידי 15 מ"ג/ק"ג קטמין, 15 מ"ג/ק"ג קסילזין הידרוכלוריד ו-0.05 מ"ג/ק"ג פנאצטין הידרוכלוריד (נפחים: 100μL/kg, טבלה של חומרים) (איור 1A), אשרו את מצב ההרדמה של בעל החיים באמצעות בדיקת גירוי כואב חזירי (למשל צביטת אוזן אחת או טלטול גפה קדמית אחת) והמדד הפיזיולוגי (למשל לחץ דם, קצב הלב והנשימה).
   הערה: ניתן לתת לחזיר זריקת חצי מנה נוספת אם הוא מראה סימני התעוררות.
3. חותכים את הבטן עם אזמל, חושפים את הווריד הנבוב התחתון וכתוצאה מכך מזריקים הפרין נתרן (5,000 U, טבלת חומרים) לתוך הווריד הנבוב התחתון עם מזרק 5 מ"ל.
4. חמש דקות לאחר מכן, הכנס קטטר לאבי העורקים הבטני לדם, חתך את עור החזה וחתך את הסרעפת באזמל ולאחר מכן חתך את החדר השמאלי.
   הערה: ודא כי חזיר הוא המתת חסד על ידי בדיקת דופק אבי העורקים לאחר דם לחתוך את הלב.
5. הבלו את הצלעות עם מלקחיים עצם (טבלה של חומרים) ולחשוף את הלב והריאות. מצאו את אבי העורקים האחורי ללב ולריאות והדקו את שני הקצוות. שטפו את אבי העורקים פעם אחת עם מאגר כביסה מקורר מראש - 1x תמיסת PBS (pH 7.4) עם 1% (v/v) פניצילין/סטרפטומיצין. (איור 1B,C).
6. גזרו את אבי העורקים במספריים והשאירו את אבי העורקים מהודק בכל קצה. הבלו עודף רקמה סביב אבי העורקים עם מלקחיים סטריליים מספריים. הכניסו את אבי העורקים לתוך צינור צנטריפוגה של 50 מ"ל, שטפו את אבי העורקים עם חיץ כביסה מקורר מראש 3x (30 מ"ל לכל שטיפה), והעבירו את אבי העורקים למעבדה (איור 1D).

תוצאות

איור 1: ההליך הכירורגי והכריתה של אבי העורקים מחזיר מיניאטורי. (A) תצלום של חזיר מיניאטורי (במה). (B) אבי העורקים נחשף לאחר לפרטומיה ותורקוטומיה. (C) אבי העורקים מהודק בכל קצה. (D) אבי העורקים ממוקם בתוך צינור של 50 מ"ל עם חיץ כביסה קרה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
20 x פתרון PBS (pH 7.4, ללא Nuclease)	סנגון ביוטק	B540627#
75% אלכוהול רפואי	גווילין LiFeng רפואי אספקה ושות', בע מ סין
מלקחי עצמות	בייג'ינג HeLi KeChuang טכנולוגיה פיתוח ושות', בע"מ סין	HL-YGQ
מזרק חד פעמי בון (10 מ"ל)	ג'יאנגסו Yile רפואי מאמר ושות', בע מ סין
הזרקת קטמין מורכבת	מפעל תרופות וטרינריות של שניאנג, סין		קטמין הידרוכלוריד: 0.3 גרם/2 מ"ל, קסילזין הידרוכלוריד: 0.3 גרם/2 מ"ל, פנאצטין הידרוכלוריד: 1 מ"ג/2 מ"ל
מלקחיים	ShangHai מכשירים רפואיים ושות', בע מ סין
הפרין נתרן	ג'יאנגסו WanBang ביופרמצבטיקה ושות', בע מ סין
תמיסת יוד	גווילין LiFeng רפואי אספקה ושות', בע מ סין
חזיר מיניאטורי (Bama או Wuzhishan)	קאנג יי אקולוגי חקלאות ושות', בע"מ, סין
פניצילין/סטרפטומיצין	לייף טכנולוגיות	15070063#
מספריים	ShangHai מכשירים רפואיים ושות', בע מ סין
אזמל כירורגי	ShangHai מכשירים רפואיים ושות', בע מ סין	22#