יצירת מודל פגם קלווריאלי של ארנב: הליך כירורגי ליצירת פגמים עגולים בחלק העליון של גולגולת הארנב להערכת חומרים תחליפי עצם ליכולות התחדשות עצם

תקציר

מקור: Marger, L. et al., מודל קלברי של הגדלת עצם בארנב להערכת צמיחת עצם וניאו-וסקולריזציה בחומרי תחליפי עצם. J. Vis. Exp. (2019).

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך הכירורגי ליצירת מודל קלוואריאלי של ארנב כדי להעריך את יכולות התחדשות העצם של חומרי החלפת דגימת עצם מעניינים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. כירורגיה

1. הכנת האתר
   1. הניחו את הארנב על כרית מחוממת (39°C) המכוסה על ידי כרית מזרן (כדי למנוע כוויות) על שולחן הניתוחים. לגלח את הקרקפת.
   2. יש למרוח ג'ל סיכה על העיניים כדי למנוע גירוי ויובש. לחטא את האתר על ידי קרצוף העור עם יוד פובידון (10%). לאחר מכן עטפו את הארנב עם וילון כירורגי סטרילי וחתכו אזור גישה לגולגולת.
   3. לחטא את אתר הניתוח עם יוד פובידון (10%) בפעם השנייה. יש למרוח ג'ל סיכה על העיניים כדי למנוע גירוי ויובש.
   4. הכינו שולחן עטוף (שפשוף סטרילי) עליו ניתן להניח את מגש הניתוחים השלם.
2. פתיחת אתר כירורגי
   1. הרדמה מקומית עם הזרקה תת עורית (SC) של לידוקאין 2% (1 מ"ל) על הגולגולת.
   2. חותכים דרך העור (עם אזמל) לאורך קו הקשת הקלבריאלי, מהמסלולים לבליטה העורפית החיצונית (~ 4 ס"מ אורך). ודא כי periosteum הוא חתך.
   3. הרימו בעדינות את הפריאוסטאום (עם מעלית פריאוסטיאלית) משני צדי החתך. יש לשטוף את האתר במי מלח סטריליים.
3. מיקום צילינדר
   1. אתרו את התפרים החציוניים והעטרתיים בגולגולת (איור 2A, B). שימו לב שקווים אנטומיים אלה יוצרים צלב. הצילינדרים ימוקמו בכל אחד מהרבעים שהוגדרו על ידי הצלב, ויבטיחו שקצה הגליל לא יהיה מעל התפר (איור 2C).
   2. הניחו את הצילינדר הראשון על הרביע העליון השמאלי (עצם קדמית שמאלית), ונסו להניח את המכשיר שטוח. תקן במצב עם לחץ יד חזק והברג מיקרו-בורג, עד שתורגש התנגדות. ודא שראש הבורג צמוד לפני השטח של לשונית הצילינדר.
   3. חזור על אותו הליך בכרטיסייה השנייה כדי לקבע את הגליל בחוזקה על הגולגולת. ודא כי הצילינדר מקובע הרמטית לעצם.
   4. חזור על ההליך ברבע העליון הימני (עצם קדמית ימנית), רבע תחתון שמאלי (עצם קודקודית שמאלית) ורבע תחתון ימני (עצם קודקודית ימנית).
4. קידוח עצם של 5 חורים תוך-מדולריים בתוך השטח התחום על-ידי הצילינדרים (איור 1)
   1. קדח חור intramedullary תחת השקיה מלוחים (0.8 מ"מ קוטר, ~ 1 מ"מ עומק) עם בור עגול על העצם, במרכז השטח מוקף על ידי הצילינדר. ודא כי דימום מופיע.
   2. קודחים שני חורים תוך-מדולריים נוספים לאורך הציר העוברים דרך שני ברגי הלשוניות, בקצוות הפנימיים של הצילינדר. לאורך הגרזן המאונך, קדח שני חורים תוך-מדולריים נוספים בקצוות הפנימיים של הצילינדר. ודא כי דימום מופיע.
   3. חזור על הפעולה בתוך שלושת הצילינדרים האחרים.
5. מילוי גלילים בדגימות חומר ומכסה (איור 3)
   1. הכינו את חומר תחליף העצם הרצוי בהתאם להוראות היצרן או מפרט החומר.
   2. ממלאים את הצילינדר הראשון עד אפס מקום בדגימת החומר וסוגרים את הצילינדר על ידי התאמת המכסה. חזור על התהליך ב-3 הצילינדרים האחרים.
6. סגירת אתר כירורגי
   1. סגור את העור מעל הצילינדרים עם תפר לסירוגין שאינו ניתן לספיגה חוזרת.
   2. יש למרוח חבישה הניתנת לריסוס על הפצע.

2. טיפול לאחר ניתוח

1. להפסיק משככי כאבים והרדמה (propofol ו fentanyl perfusion arrest) לספק ולבדוק את ההתאוששות של נשימה אוטונומית.
2. יש להפסיק את האוורור לאחר שבעל החיים חזר לנשימה אוטונומית. שמור על בעל החיים תחת חמצן טהור לפני התעוררות מלאה.
3. הזריקו buprenorphine hydrochloride SC (0.02 מ"ג/ק"ג, 0.03 מ"ג/מ"ל, 0.67 מ"ל/ק"ג) וחזרו על הזריקה כל 6 שעות במשך 3 ימים כמשככי כאבים לאחר הניתוח.
4. להעביר את החיה לתוך הדיור הרגיל שלה עם מים האכלה מלאה.

תוצאות

איור 1: מפרטים של גלילי הצצה. שני חורים (בקוטר 0.8 מ"מ) נקדחו על לשוניות הייצוב הרוחביות להברגה. מיקומם של 5 החורים התוך-מדולריים (בקוטר 0.8 מ"מ) שיש לקדוח על הגולגולת בתוך השטח התחום על ידי הגליל מסומנים בעיגולים אדומים.

איור 2: תמונה מייצגת של גולגולת הארנב ו...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
סמים
פנטניל	בישל		לשיכוך כאבים
קטלאר 50 מ"ג/מ"ל	פייזר		קטמין להרדמה
לידוהקס	ביכסל		ג'ל סיכה לעיניים
הפוך	סמית' ואחיינו	66004978	חבישה ניתנת לריסוס
פובידון יוד 10%, בטאדין	מונדיפארמה		סוכן אנטי זיהומי
פרופופול 2%	בראון	3538710	להרדמה
רפידוקאין 2%	סינטטיקה		הרדמה מקומית
רומפון 2%	באייר		קסילזין להרדמה
סבופלורן 5%	Abbvie		להרדמה
ציוד
פרסניוס ויאל פיילוט C	Imexmed		משאבת עירוי
פד מחומם	מכשיר הרווארד
יניקה דומיננטית 50	Medela
צינורות יניקה אופטימוס	פרומדיקל	80342.2
מנוע כירורגי	שיק שיניים	Qube	קידוח חורים intramedullary
איוורור	מאקט סרוו1
חומר
צילינדרים ומכסים	בוטיפלסט	מותאמים אישית	הרכב: PEEK (פולי אתר קטון)
פיר שמירה עצמית ידני	גלובלד	ACT1K
ידית אחיזה ניידת לפיר תומך עצמי	גלובלד	MTM
ברגי קידוח עצמי	גלובלד	VA1.2KL4	ברגי הנעה צולבת המורכבים מטיטניום כיתה 5, ISO 5832-3
מגש כירורגי
צינור אנדוטרכאלי קוטר Shiley 2,5mm	קובידיאן	86233	לאינטובציה
צינור אנדוטרכאלי קוטר Shiley 4,9mm	קובידיאן	107-35 גרם	לאינטובציה
אתיקון פרולן 4-0	Ehticon	8581H	תפר שאינו ניתן לספיגה חוזרת
מלקחיים	מרסל בלאן	BD027R	145 מ"מ
צנתר אינטובציה	קוק רפואי		מדריך לאינטובציה
בורות כירורגיות עגולות	פטרסון	78000	קוטר 0.8 מ"מ, קידוח חורים תוך מדולריים
אזמל	סוואן-מורטון		N°10 ו-N°15
מספריים	מרסל בלאן	657	180 מ"מ
מזרקים Omnifix	בראון	4616057V	5 מ"ל, 10 מ"ל ו-50 מ"ל
ונפלון G22	בראון	42690985-01	בטיחות Vasofix עבור קו האוזן IV